包含抗NRP2抗體的組合物和方法與流程

包含抗nrp2抗體的組合物和方法
1.相關申請的交叉引用
2.本技術根據35 u.s.c.
§
119(e)要求于2020年5月14日提交的美國臨時申請第63/024,960號和2019年10月3日提交的美國臨時申請第62/910,042號的權益，所述美國臨時申請中的每一個通過引用以其整體并入。
3.關于序列表的聲明
4.與本技術相關的序列表是以文本格式代替紙質副本提供的，并且在此通過引用并入說明書中。包含序列列表的文本文件的名稱是atyr_136_02wo_st25.txt。文本文件大約是261kb，在2020年10月2日創建，并通過efs-web以電子方式提交。
5.背景
技術領域
6.本公開內容的實施方案涉及特異性結合人神經纖毛蛋白-2(nrp2)多肽的親和力成熟的和人源化的抗體及其抗原結合片段，其包括調節人nrp2與至少一種nrp2配體之間的結合相互作用的那些，并且由此調節隨后的nrp2介導的下游信號傳導事件，包括用于調節nrp2活性和治療疾病如nrp2相關疾病的相關治療組合物和方法。
7.相關技術的描述
8.最近的研究進展表明，trna合成酶除了在蛋白質合成中充分表征的作用之外還在細胞應答中起重要作用。特別地，人們日益認識到，在細胞內和細胞外環境中，trna合成酶在應答細胞應激和組織內穩態方面參與一系列先前未認識到的作用。
9.在闡明細胞外hars衍生的蛋白質的作用(包括推定的細胞受體神經纖毛蛋白-2(nrp2或nrp-2)的鑒定)方面已經取得了顯著的進展。hars與nrp2的相互作用看起來由hars的n-末端區域介導，并且可導致nrp2的細胞功能的重要變化。
10.因此，這種新的調節途徑的當前發現代表了先前未知的機制，其充當細胞過程的中心調節物，所述細胞過程包括例如與癌癥起始、生長、轉移和化學抗性以及肌肉、血管、神經元、骨和免疫穩態直接相關的軸突導向、內吞作用、細胞遷移、增殖、存活、凋亡、淋巴管生成、細胞分化和細胞粘附。這些過程中的任何一個的失調都可能導致一系列疾病，所述疾病可以通過開發選擇性地靶向神經纖毛蛋白-2軸的抗nrp2抗體來解決。本公開內容提供了此類抗體和相關實施方案。
11.簡要概述
12.本公開內容的實施方案包括特異性結合人神經纖毛蛋白2(nrp2)多肽的抗體或其抗原結合片段(抗nrp2抗體)。
13.某些實施方案包括治療組合物，其包含特異性結合人神經纖毛蛋白-2(nrp2)多肽的至少一種抗體或其抗原結合片段(抗nrp2抗體)，其中所述至少一種抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區(vh)序列，其包含特異性結合所述人nrp2多肽的選自表a1或表a3的互補決定區vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列及其變體；以及輕鏈可變區(v
l
)序列，其包含特異性結合所述人nrp2多肽的選自表a1或表a3的互補決定區v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列及其變
體。
14.在一些實施方案中，
15.所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列分別包含seq id no:1-3，以及所述v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列分別包含seq id no:4-6，包括其變體；
16.所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列分別包含seq id no:7-9，以及所述v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列分別包含seq id no:10-12，包括其變體；
17.所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列分別包含seq id no:13-15，以及所述v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列分別包含seq id no:16-18，包括其變體；
18.所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列分別包含seq id no:19-21，以及所述v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列分別包含seq id no:22-24，包括其變體；
19.所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列分別包含seq id no:25-27，以及所述v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列分別包含seq id no:28-30，包括其變體；
20.所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列分別包含seq id no:31-33，以及所述v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列分別包含seq id no:34-36，包括其變體；
21.所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列分別包含seq id no:34-39，以及所述v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列分別包含seq id no:40-42，包括其變體；
22.所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列分別包含seq id no:57-59，以及所述v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列分別包含seq id no:60-62，包括其變體；或者
23.所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3序列分別包含seq id no:63-65，以及所述v
l
cdr1、v
l
cdr2和v
l
cdr3序列分別包含seq id no:66-68，包括其變體。
24.在一些實施方案中，所述vh序列與選自表a2的序列至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同，任選地其中所述vh序列在框架區中具有1、2、3、4或5種改變。在一些實施方案中，所述v
l
序列與選自表a2的序列至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同，任選地其中所述v
l
序列在框架區中具有1、2、3、4或5種改變。
25.在一些實施方案中：
26.所述vh序列包含與seq id no:43至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:44至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列；
27.所述vh序列包含與seq id no:45至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:46至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列；
28.所述vh序列包含與seq id no:47至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:48至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列；
29.所述vh序列包含與seq id no:49至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:50至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列；
30.所述vh序列包含與seq id no:51至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:52至少80％、85％、90％、95％、97％、
98％、99％或100％相同的序列；
31.所述vh序列包含與seq id no:53至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:54至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列；或者
32.所述vh序列包含與seq id no:55至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:56至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列；
33.所述vh序列包含與seq id no:69至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:70至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列；
34.所述vh序列包含與seq id no:71至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:72至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列；或者
35.所述vh序列包含與seq id no:73至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列，以及所述v
l
序列包含與seq id no:74至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
36.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段任選地以約10pm至約500pm或至約50nm，或者以約、至少約或不超過約10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、300、400、500、600、700、800、900pm、1nm、10nm、25nm或50nm的親和力，或者任選地以范圍為約10pm至約500pm、約10pm至約400pm、約10pm至約300pm、約10pm至約200pm、約10pm至約100pm、約10pm至約50pm、或約20pm至約500pm、約20pm至約400pm、約20pm至約300pm、約20pm至約200pm、約20pm至約100pm、約20pm至約50pm、或約30pm至約500pm、約30pm至約400pm、約30pm至約300pm、約30pm至約200pm、約30pm至約100pm、約30pm至約50pm、或約20pm至約200pm、約30pm至約300pm、約40pm至約400pm、約50pm至約500pm、約60pm至約600pm、約70pm至約700pm、約80pm至約800pm、約90pm至約900pm、約100pm至約1nm、約1nm至約5nm、約5nm至約10nm、約10nm至25nm、或約25nm至約50nm的親和力特異性結合選自表n1的全長人nrp2多肽或人nrp2多肽，任選地其中所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合天然形式的人nrp2多肽，但基本上不結合變性形式的人nrp2多肽。
37.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段任選地以約10pm至約500pm或至約50nm，或者以約、至少約或不超過約10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、300、400、500、600、700、800、900pm、1nm、10nm、25nm或50nm的親和力，或者任選地以范圍為約10pm至約500pm、約10pm至約400pm、約10pm至約300pm、約10pm至約200pm、約10pm至約100pm、約10pm至約50pm、或約20pm至約500pm、約20pm至約400pm、約20pm至約300pm、約20pm至約200pm、約20pm至約100pm、約20pm至約50pm、或約30pm至約500pm、約30pm至約400pm、約30pm至約300pm、約30pm至約200pm、約30pm至約100pm、約30pm至約50pm、或約20pm至約200pm、約30pm至約300pm、約40pm至約400pm、約50pm至約500pm、約60pm至約600pm、約70pm至約700pm、約80pm至約800pm、約90pm至約900pm、約100pm至約1nm、約1nm至約5nm、約5nm至約10nm、約10nm至25nm、或約25nm至約50nm的親和力
特異性結合神經纖毛蛋白結構域中的至少一個表位，所述神經纖毛蛋白結構域選自以下的一種或多種：神經纖毛蛋白b1結構域、神經纖毛蛋白a1結構域、神經纖毛蛋白a2結構域、神經纖毛蛋白b2結構域、神經纖毛蛋白c結構域、神經纖毛蛋白a1/a2組合結構域、神經纖毛蛋白b1/b2組合結構域、神經纖毛蛋白a2/b1組合結構域、神經纖毛蛋白b2/c組合結構域、神經纖毛蛋白a2/b1/b2組合結構域、神經纖毛蛋白a2/b1/b2/c組合結構域、神經纖毛蛋白a1/a2/b1組合結構域、神經纖毛蛋白a1/a2/b1/b2組合結構域、神經纖毛蛋白a1/a2/b1/b2/c組合結構域和神經纖毛蛋白b1/b2/c組合結構域。
38.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述神經纖毛蛋白a1結構域、所述神經纖毛蛋白a2結構域和/或所述神經纖毛蛋白a1a2組合結構域(包括相鄰的接頭區域)中的至少一個表位，所述表位任選地位于約以下殘基處：
39.如由人nrp2前體序列所定義的(神經纖毛蛋白a1結構域)殘基20-148、30-141、40-141、50-141、60-141、70-141、80-141、90-141、100-141、110-141、120-141、130-141；20-130、20-120、20-110、20-100、20-90、20-80、20-70、20-60、20-50、20-40或20-30(參見表n1)；
40.如由人nrp2前體序列所定義的(神經纖毛蛋白a2結構域)殘基142-280、150-265、160-265、170-265、180-265、190-265、200-265、210-265、220-265、230-265、240-265、250-265、260-265、141-270、141-260、141-250、141-240、141-230、141-220、141-210、141-200、141-190、141-180、141-170、141-160、141-150、200-250、210-250、220-250、230-250、200-240、210-240、220-240、230-240、227-247、228-247、229-247、230-247、231-247、232-247、233-247、234-247、235-247、236-247；227-246、227-245、227-244、227-243、227-242、227-241、227-240、227-239、227-238；235-240、236-239、236-238或殘基237(參見表n1)；或者
41.如由人nrp2前體序列所定義的(組合的a1a2結構域)殘基20-280、30-280、40-280、50-280、60-280、70-280、80-280、90-280、100-280、110-280、120-280、130-280、140-280、150-280、160-280、170-280、180-280、190-280、200-280、210-280、220-280、230-280、240-280、260-280、270-280、20-270、20-260、20-250、20-240、20-230、20-220、20-210、20-200、20-190、20-180、20-170、20-160、20-150、20-140、20-130、20-120、20-110、20-100、20-90、20-80、20-70、20-60、20-50、20-40或20-30(參見表n1)。
42.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述神經纖毛蛋白b1結構域、所述神經纖毛蛋白b2結構域和/或所述神經纖毛蛋白b1/b2組合結構域(包括相鄰的接頭區域)中的至少一個表位，所述表位任選地位于約以下殘基處：
43.如由人nrp2前體序列所定義的(神經纖毛蛋白b1結構域)殘基299-420、266-426、280-426、290-426、300-426、310-426、320-426、330-426、340-426、350-426、360-426、370-426、380-426、390-426、400-426、410-426、420-426、280-420、280-410、280-400、280-390、280-380、280-370、280-360、280-350、280-340、280-330、280-320、280-310、280-300或280-290(參見表n1)，任選地其中所述表位是包含如由所述人nrp2前體序列所定義的殘基299y、354n和/或416s中的一個、兩個或三個的不連續表位；
44.如由人nrp2前體序列所定義的(神經纖毛蛋白b2結構域)殘基438-591、450-591、460-591、470-591、480-591、490-591、500-591、510-591、520-591、530-591、540-591、550-591、560-591、570-591、580-591、438-590、438-580、438-570、438-560、438-550、438-540、
438-530、438-520、438-510、438-500、438-490、438-480、438-470、438-460或438-450(參見表n1)；或者
45.如由人nrp2前體序列所定義的(神經纖毛蛋白b1/b2組合結構域)殘基266-591、276-591、286-591、296-591、306-591、316-591、326-591、336-591、346-591、356-591、366-591、376-591、386-591、396-591、406-591、416-591、426-591、436-591、446-591、456-591、466-591、476-591、486-591、498-591、508-591、518-591、528-591、538-591、548-591、558-591、568-591、578-591、588-591、266-581、266-571、266-561、266-551、266-541、266-531、266-521、266-511、266-501、266-491、266-481、266-471、266-461、266-451、266-441、266-431、266-421、266-411、266-401、266-391、266-381、266-371、266-361、266-351、266-341、266-331、266-321、266-311、266-301、266-291、266-281或266-271處(參見表n1)。
46.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述神經纖毛蛋白a2/b1組合結構域和/或所述神經纖毛蛋白b2c組合結構域(包括相鄰的接頭區域)中的至少一個表位，所述表位任選地位于約以下殘基處：
47.如由人nrp2前體序列所定義的(神經纖毛蛋白a2b1組合結構域)殘基149-437、159-426、169-426、179-426、189-426、199-426、209-426、219-426、229-426,239-426、249-426、259-426、269-426、279-426、289-426、299-426、309-426、319-426、329-426、339-426、349-426、359-426、369-426、379-426、389-426、399-426、409-426、419-426、149-436、149-426、149-416、149-406、149-396、149-386、149-376、149-366、149-356、149-346、149-336、149-326、149-316、149-306、149-296、149-286、149-276、149-266、149-256、149-246、149-236、149-226、149-216、149-206、149-196、146-186、146-176、146-166或146-155處(參見表n1)；或者
48.如由人nrp2前體序列所定義的(神經纖毛蛋白b2c組合結構域)殘基438-794、448-794、458-794、468-794、478-794、487-794、497-794、507-794、517-794、527-794、537-794、547-794、557-794、567-794、587-794、597-794、607-794、617-794、627-794、637-794、647-794、657-794、667-794、677-794、687-794、697-794、707-794、717-794、727-794、737-794、747-794、757-794、767-794、777-794、787-794、427-794、438-784、438-774、438-764、438-754、438-744、438-734、438-728、438-714、438-704、438-694、438-684、438-674、438-664、438-654、438-644、438-634、438-624、438-614、438-604、438-596、438-586、438-576、438-566、438-556、438-546、438-536、438-526、438-516、438-506、438-494、438-484、438-474、438-464、438-454、438-444(參見表n1)。
49.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述神經纖毛蛋白c結構域的至少一個表位(包括相鄰的接頭區域)，所述表位任選地位于如由人nrp2前體序列所定義的大約殘基591-794、600-794、610-794、620-794、630-794、640-794、650-794、660-794、670-794、680-794、690-794、700-794、710-794、720-794、730-794、740-794、750-794、760-794、770-794、780-794、790-794、591-790、591-780、591-770、591-760、591-750、591-740、591-730、591-720、591-710、591-700、591-690、591-680、591-670、591-660、591-650、591-640、591-630、591-620、591-610或591-600處(參見表n1)。
50.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述神經纖毛蛋白b1/b2/c組合結構域中的至少一個表位(包括相鄰的接頭區域)，所述表位任選地位
于如由人nrp2前體序列所定義的大約殘基276-794、286-794、296-794、306-794、316-794、326-794、336-794、346-794、356-794、366-794、376-794、387-794、396-794、406-794、416-794、426-794、436-794、446-794、456-794、466-794、476-794、486-794、496-794、506-794、516-794、526-794、536-794、546-794、556-794、566-794、576-794、586-794、596-794、606-794、616-794、626-794、636-794、646-794、656-794、666-794、676-794、686-794、696-794、706-794、716-794、726-794、736-794、746-794、756-794、766-794、776-794、786-794、266-794、276-784、276-774、276-764、276-754、276-744、276-734、276-724、276-714、276-704、276-694、276-684、276-674、276-664、276-654、276-644、276-634、276-624、276-614、276-604、276-594、276-584、276-574、276-564、276-554、276-544、276-534、276-524、276-514、276-504、276-594、276-584、276-574、276-564、276-554、276-544、276-534、276-524、276-514、276-504或276-496處(參見表n1)3。
51.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合近膜結構域(參見表n1)中的至少一個表位，所述近膜結構域任選地選自nrp2a的近膜結構域(變體1)、nrp2a的近膜結構域(變體2)、nrp2a的近膜結構域(變體3)、nrp2b的近膜結構域(變體4)和nrp2b的近膜結構域(變體5)中的一個或多個，包括它們的組合。
52.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合由兩個或更多個不連續的表位區域組成的構象表位，任選地包含以下或由以下組成的構象表位：
53.(a)所述人npr2多肽的a1結構域內的第一表位區域和a2結構域內的第二表位區域；
54.(b)所述人npr2多肽的a1結構域內的第一表位區域和b1結構域內的第二表位區域；
55.(c)所述人npr2多肽的a1結構域內的第一表位區域和b2結構域內的第二表位區域；
56.(d)所述人npr2多肽的a1結構域內的第一表位區域和c結構域內的第二表位區域；
57.(e)選自變體1、2、3、4和5的所述人npr2多肽的a1結構域內的第一表位區域和近膜結構域內的第二表位區域；
58.(f)所述人npr2多肽的a2結構域內的第一表位區域和b1結構域內的第二表位區域；
59.(g)所述人npr2多肽的a2結構域內的第一表位區域和b2結構域內的第二表位區域；
60.(h)所述人npr2多肽的a2結構域內的第一表位區域和c結構域內的第二表位區域；
61.(i)選自變體1、2、3、4和5的所述人npr2多肽的a2結構域內的第一表位區域和近膜結構域內的第二表位區域；
62.(j)所述人npr2多肽的b1結構域內的第一表位區域和b2結構域內的第二表位區域；
63.(k)所述人npr2多肽的b1結構域內的第一表位區域和c結構域內的第二表位區域；
64.(l)選自變體1、2、3、4和5的所述人npr2多肽的b1結構域內的第一表位區域和近膜結構域內的第二表位區域，；
65.(m)所述人npr2多肽的b2結構域內的第一表位區域和c結構域內的第二表位區域；
66.(n)選自變體1、2、3、4和5的所述人npr2多肽的b2結構域內的第一表位區域和人npr2多肽的近膜結構域內的第二表位區域；或者
67.(o)選自變體1、2、3、4和5的所述人npr2多肽的c結構域內的第一表位區域和近膜結構域內的第二表位區域。
68.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段調節所述人nrp2多肽與至少一種nrp2配體(任選地選自表n2或表n3的nrp2配體和/或選自表h1的人組氨酰-trna合成酶(hrs)多肽，任選地選自sv9(hrs(1-60))、sv11(hrs(1-60)+(399-509))和sv14(hrs(1-100)+(399-509)的一種或多種的hrs剪接變體)的結合。
69.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段是封閉抗體，所述封閉抗體在與化學計量當量的所述人nrp2多肽預溫育后抑制所述人nrp2多肽與所述至少一種nrp2配體之間理論最大結合的約或至少約80-100％，任選地理論最大結合的約或至少約80％、85％、90％、95％或100％。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段是部分封閉抗體，所述部分封閉抗體在與化學計量當量的所述人nrp2多肽預溫育后抑制所述人nrp2多肽與所述至少一種nrp2配體之間理論最大結合的約或至少約20-80％，任選地理論最大結合的約或至少約20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述nrp2多肽的hrs多肽相互作用區域，并模擬或激動結合所述nrp2多肽的所述hrs多肽的一種或多種信號傳導活性。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述nrp2多肽的hrs多肽相互作用區域，并調節所述nrp2多肽與至少一種nrp2配體之間的結合/信號傳導活性。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段拮抗所述nrp2多肽與所述至少一種nrp2配體之間的結合/信號傳導活性。
70.在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段激動或增強所述nrp2多肽與所述至少一種nrp2配體之間的結合/信號傳導活性。在一些實施方案中，所述至少一種nrp2配體選自：
[0071]-vegf，其選自vegf-a145、vegf-a165、vegf-c、vegf-d和pigf-2中的一種或多種；
[0072]-vegf受體(vegfr)，其選自vegfr2和vegfr3；
[0073]-臂板蛋白(semaphorin)，其選自sema3-a、sema-3b、sema-3c、sema-3d、sema-3f和sema-3g中的一種或多種；
[0074]-叢狀蛋白，其選自叢狀蛋白a1、a2、a3、a4和d1中的一種或多種；
[0075]-生長因子，其選自成纖維細胞生長因子(fgf)、肝細胞生長因子(hgf)和血小板衍生生長因子(pdgf)中的一種或多種；
[0076]-生長因子受體，其選自成纖維細胞生長因子受體(fgfr)、肝細胞生長因子受體(hgfr)和血小板衍生生長因子受體(pdgf)中的一種或多種；
[0077]-半乳糖凝集素或半乳糖凝集素受體
[0078]-轉錄因子，其選自fac1和溴蛋白phd手指轉錄因子；
[0079]-適配子蛋白，其選自gipc1、gipc2和gipc3中的一種或多種；
[0080]-整合素，其選自表n3，任選地αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α6β1和α6β4中的一種或多種；
[0081]-轉化生長因子β，其選自tgfβ1、tgfβ2、tgfβ3及其相應的tgfβ受體中的一種或多
種；以及
[0082]-hrs多肽，其選自表h1，任選地選自hisrs
n1
、hisrs
n2
、hisrs
n3
、hisrs
n4(
sv9)、hisrs
n5
、hisrs
c1
、hisrs
c2
、hisrs
c3
、hisrs
c4
、hisrs
c5
、hisrs
c6
、hisrs
c7
、hisrs
c8
(sv11)和hisrs
c9
(sv14)中的一種或多種的hrs剪接變體。
[0083]
在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段拮抗所述nrp2多肽與叢狀蛋白受體和/或臂板蛋白之間的結合/信號傳導活性，而基本上不調節所述nrp2多肽與vegfr2或vegfr3或vegf-c之間的結合/信號傳導活性。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段拮抗所述nrp2多肽與叢狀蛋白受體和/或臂板蛋白之間的結合/信號傳導活性，而基本上不調節所述nrp2多肽與hrs多肽之間的結合/信號傳導活性。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段拮抗所述nrp2多肽與叢狀蛋白受體和/或臂板蛋白之間的結合/信號傳導活性，而基本上不調節所述nrp2多肽與hrs多肽之間的結合/信號傳導活性，并且基本上不調節所述nrp2多肽與vegfr2或vegfr3或vegf-c之間的結合/信號傳導活性。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段拮抗所述nrp2多肽與vegfr3之間的結合/信號傳導活性，而基本上不調節所述nrp2多肽與叢狀蛋白受體和/或臂板蛋白之間的結合/信號傳導活性。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段拮抗所述nrp2多肽與vegfr3或vegf-c之間的結合/信號傳導活性，而基本上不調節所述nrp2多肽與不同配體，任選地hrs多肽之間的結合/信號傳導活性。
[0084]
在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段拮抗所述nrp2多肽與叢狀蛋白受體之間的結合/信號傳導活性，而基本上不調節臂板蛋白3與nrp2的配體結合。在一些實施方案中，所述叢狀蛋白受體選自叢狀蛋白a1、a2、a3、a4和d1。在一些實施方案中，所述臂板蛋白選自臂板蛋白3b、3c、3d、3f和3g。
[0085]
在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述人nrp2a2結構域內的至少5個連續氨基酸的表位，其中所述至少一種抗體或其抗原結合片段選擇性地抑制nrp2與叢狀蛋白a1之間的受體二聚化，而基本上不抑制nrp2與flt4(vegfr3)之間的二聚化。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合人nrp2前體(參見表n1)的氨基酸232-242內的表位。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述人nrp2b1結構域的氨基酸299-416內包含的不連續表位，其中所述至少一種抗體或其抗原結合片段選擇性地抑制nrp2與flt4(vegfr3)、與kdr(vegfr2)之間的受體二聚化，而基本上不抑制nrp2與叢狀蛋白a1之間的二聚化。
[0086]
在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述人nrp2b2結構域內的至少5個連續氨基酸的表位，其中所述至少一種抗體或其抗原結合片段抑制nrp2與flt4(vegfr3)之間的受體二聚化并且抑制nrp2與叢狀蛋白a1之間的二聚化。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段特異性結合所述人nrp2c結構域內的至少5個連續氨基酸的表位，其中所述至少一種抗體或其抗原結合片段抑制nrp2與叢狀蛋白a1之間的受體二聚化并且部分地抑制nrp2和flt4(vegfr3)之間的二聚化。
[0087]
在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段對(i)人nrp2多肽和(ii)獼猴nrp2多肽的相應區域中的每一種具有親和力(kd或ec
50
)，其中對(i)和(ii)的親和力在約20pm至約200pm、約30pm至約300pm、約40pm至約400pm、約50pm至約500pm、約60pm至約600pm、約70pm至約700pm、約80pm至約800pm、約90pm至約900pm、約100pm至約1nm、約0.4
至約1.2nm、約0.9至約5.5nm、約0.9至約5nm或約1nm至約10nm的范圍內。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段對(i)人nrp2多肽和(ii)鼠nrp2多肽的相應區域中的每一種具有親和力(kd或ec
50
)，其中對(i)和(ii)的親和力在約20pm至約200pm、約30pm至約300pm、約40pm至約400pm、約50pm至約500pm、約60pm至約600pm、約70pm至約700pm、約80pm至約800pm、約90pm至約900pm、約100pm至約1nm或約1nm至約10nm的范圍內。
[0088]
在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段選擇性地結合nrp2的nrp2a同種型(任選地表n1的變體1、2和/或3)，并且基本上不結合nrp2b同種型(任選地表n1的變體4和/或5)。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段選擇性地結合nrp2b同種型(任選地表n1的變體4和/或5)，并且基本上不結合nrp2a同種型(任選地表n1的變體1、2和/或3)。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段減少nrp2多肽之間的同源二聚化或異源二聚化，任選地在所述抗nrp2抗體與基本上化學計量當量的nrp2多肽預溫育后將所述nrp2多肽之間的同源二聚化或異源二聚化減少約或至少約20-100％(例如約20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％或100％)，任選地在nrp2配體的存在下。
[0089]
在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段增強nrp2多肽之間的同源二聚化或異源二聚化，任選地在所述抗nrp2抗體與基本上化學計量當量的nrp2多肽預溫育后將所述nrp2多肽之間的同源二聚化或異源二聚化增強約或至少約20-100％(例如約20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％或100％)，任選地在nrp2配體的存在下。在一些實施方案中，相對于鼠nrp2多肽，所述至少一種抗體或其抗原結合片段選擇性地結合人nrp2多肽(參見表n1)，任選地其中其對所述人nrp2多肽的親和力顯著強于其對所述鼠nrp2多肽的親和力，任選地強約或至少約2、5、10、20、30、40、50、100、500或1000倍或更多。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段結合所述人nrp2多肽并且基本上不結合所述鼠nrp2多肽，任選地其中所述鼠nrp2多肽是小家鼠(mus musculus)nrp2多肽。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段結合b1結構域中的表位，其包含如由人nrp2前體序列所定義的殘基299y、354n和416s(參見表n1)。
[0090]
在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段包含iga(包括亞類iga1和iga2)、igd、ige、igg(包括亞類igg1、igg2、igg3和igg4)或igm fc結構域，任選地人fc結構域、或其雜交體和/或變體。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段包含在人中具有高效應子功能的igg fc結構域，任選地igg1或igg3 fc結構域。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段包含在人中具有低效應子功能的igg fc結構域，任選地igg2或igg4 fc結構域。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段包含任選地選自表f1的igg1或igg4 fc結構域。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段包含具有與fcrn改變結合的修飾的igg1或igg4 fc結構域，任選地其中所述修飾的igg1或igg4 fc結構域包含yd(m252y/t256d)、dq(t256d/t307q)、dw(t256d/t307w)、yte(m252y/s254t/t256e)、aaa(t307a/e380a/n434a)、ls(m428l/n434s)、m252y、t256d/e、k288d/n、t307q/w、e380c、n434fy和/或y436h/n/w突變(eu編號)中的任何一種或多種，包括它們的組合。
[0091]
在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段是單克隆抗體。在一些
實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段是人源化抗體。在一些實施方案中，所述至少一種抗體或其抗原結合片段是fv片段、單鏈fv(scfv)多肽、adnectin、anticalin、適配體、avimer、駱駝科動物抗體、設計的錨蛋白重復蛋白(darpin)、微型抗體、納米抗體或單抗體。
[0092]
在一些實施方案中，相對于所述至少一種抗體或抗原結合片段，基于蛋白，所述治療組合物具有至少約80％、85％、90％、95％、98％或99％的純度，并且基本上不含聚集體。在一些實施方案中，所述治療組合物基本上不含內毒素。在一些實施方案中，所述治療組合物是無菌可注射溶液，任選地適于靜脈內施用、肌內施用、皮下施用或腹腔內施用。
[0093]
在一些實施方案中，所述治療組合物還包含至少一種另外的藥劑，所述藥劑選自以下的一種或多種：癌癥免疫治療劑、化療劑、激素治療劑和激酶抑制劑。在一些實施方案中，所述癌癥免疫治療劑選自以下的一種或多種：免疫檢查點調節劑、癌癥疫苗、溶瘤病毒、細胞因子和基于細胞的免疫療法。在一些實施方案中，所述免疫檢查點調節劑是多肽，任選的抗體或其抗原結合片段或配體、或小分子。在一些實施方案中，所述免疫檢查點調節劑包含：
[0094]
(a)抑制性免疫檢查點分子的拮抗劑；或者
[0095]
(b)刺激性免疫檢查點分子的激動劑，
[0096]
任選地其中所述免疫檢查點調節劑特異性結合所述免疫檢查點分子。
[0097]
在一些實施方案中，所述抑制性免疫檢查點分子選自以下的一種或多種：程序性死亡配體1(pd-l1)、程序性死亡1(pd-1)、程序性死亡配體2(pd-l2)、細胞毒性t淋巴細胞相關蛋白4(ctla-4)、吲哚胺2,3-雙加氧酶(ido)、色氨酸2,3-雙加氧酶(tdo)、t細胞免疫球蛋白結構域和粘蛋白結構域3(tim-3)、淋巴細胞活化基因-3(lag-3)、t細胞活化的v結構域ig抑制劑(vista)、b和t淋巴細胞弱化子(btla)、cd160、皰疹病毒進入介導子(hvem)以及具有ig和itim結構域的t細胞免疫受體(tigit)。
[0098]
在一些實施方案中：
[0099]
所述拮抗劑是pd-l1和/或pd-l2拮抗劑，其任選地選自與pd-l1和/或pd-l2特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、阿特朱單抗(mpdl3280a)、阿維單抗(msb0010718c)和德瓦魯單抗(medi4736)中的一種或多種；
[0100]
所述拮抗劑是pd-1拮抗劑，其任選地選自與pd-1特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、鈉武單抗、派姆單抗、mk-3475、amp-224、amp-514、pdr001和匹地利珠單抗中的一種或多種；
[0101]
所述拮抗劑是ctla-4拮抗劑，其任選地選自與ctla-4特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、伊匹單抗和曲美木單抗中的一種或多種；
[0102]
所述拮抗劑是ido拮抗劑，其任選地選自與ido特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、吲哚莫德(nlg-8189)、1-甲基-色氨酸(1mt)、β-咔啉(去甲哈爾滿；9h-吡啶并[3,4-b]吲哚)，迷迭香酸和艾卡哚司他中的一種或多種；
[0103]
所述拮抗劑是tdo拮抗劑，其任選地選自與tdo特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、680c91和lm10中的一種或多種；
[0104]
所述拮抗劑是tim-3拮抗劑，其任選地選自與tim-3特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子中的一種或多種；
[0105]
所述拮抗劑是lag-3拮抗劑，其任選地選自與lag-3特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子和bms-986016中的一種或多種；
[0106]
所述拮抗劑是vista拮抗劑，其任選地選自與vista特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子中的一種或多種；
[0107]
所述拮抗劑是btla、cd160和/或hvem拮抗劑，其任選地選自與btla、cd160和/或hvem特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子中的一種或多種；和/或
[0108]
所述拮抗劑是tigit拮抗劑，其任選地選自與tigit特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子中的一種或多種。
[0109]
在一些實施方案中，所述刺激性免疫檢查點分子選自以下的一種或多種：ox40、cd40、糖皮質激素誘導的tnfr家族相關基因(gitr)、cd137(4-1bb)、cd27、cd28、cd226和皰疹病毒進入介導子(hvem)。
[0110]
在一些實施方案中：
[0111]
所述激動劑是ox40激動劑，其任選地選自與ox40特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、ox86、fc-ox40l和gsk3174998中的一種或多種；
[0112]
所述激動劑是cd40激動劑，其任選地選自與cd40特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、cp-870,893、達西珠單抗、chi lob 7/4、adc-1013和rhcd40l中的一種或多種；
[0113]
所述激動劑是gitr激動劑，其任選地選自與gitr特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、incagn01876、dta-1和medi1873中的一種或多種；
[0114]
所述激動劑是cd137激動劑，其任選地選自與cd137特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、烏托魯單抗和4-1bb配體中的一種或多種；
[0115]
所述激動劑是cd27激動劑，其任選地選自與cd27特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、伐立魯單抗和cdx-1127(1f5)中的一種或多種；
[0116]
所述激動劑是cd28激動劑，其任選地選自與cd28特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體和tab08中的一種或多種；和/或
[0117]
所述激動劑是hvem激動劑，其任選地選自與hvem特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體中的一種或多種。
[0118]
在一些實施方案中，所述癌癥疫苗選自以下的一種或多種：oncophage，人乳頭瘤病毒hpv疫苗，任選地加德西或希瑞適，乙肝疫苗，任選地engerix-b、recombivax hb或twinrix和西普魯塞-t(普羅文奇)，或者所述癌癥疫苗包含選自以下的一種或多種的癌癥抗原：人her2/neu、her1/egf受體(egfr)、her3、a33抗原，b7h3、cd5、cd19、cd20、cd22、cd23(ige受體)、mage-3、c242抗原、5t4、il-6、il-13，血管內皮生長因子vegf(例如vegf-a)vegfr-1、vegfr-2、cd30、cd33、cd37、cd40、cd44、cd51、cd52、cd56、cd74、cd80、cd152、cd200、cd221、ccr4、hla-dr、ctla-4、npc-1c、腱生蛋白、波形蛋白、胰島素樣生長因子1受體(igf-1r)、甲胎蛋白、胰島素樣生長因子1(igf-1)、碳酸酐酶9(ca-ix)、癌胚抗原(cea)、鳥苷酸環化酶c、ny-eso-1、p53、存活素、整合素αvβ3、整合素α5β1、葉酸受體1、跨膜糖蛋白nmb、成纖維細胞活化蛋白α(fap)、糖蛋白75、tag-72、muc1、muc16(或ca-125)、磷脂酰絲氨酸、前列腺特異性膜抗原(pmsa)、nr-lu-13抗原、trail-r1、腫瘤壞死因子受體超家族成員10b(tnfrsf10b或trail-r2)、slam家族成員7(slamf7)、egp40泛癌抗原、b細胞活化因子
(baff)、血小板衍生生長因子受體、糖蛋白epcam(17-1a)、程序性死亡-1、蛋白二硫化物異構酶(pdi)、肝再生磷酸酶3(prl-3)、前列腺酸性磷酸酶、lewis-y抗原、gd2(在神經外胚層來源的腫瘤上表達的二唾液酸神經節苷脂)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)和間皮素。
[0119]
在一些實施方案中，所述溶瘤病毒選自以下的一種或多種：talimogene laherparepvec(t-vec)、柯薩奇病毒a21(cavatak
tm
)、安柯瑞(h101)、pelareorep塞內加谷病毒(ntx-010)、塞內卡病毒svv-001、coload1、seprehvir(hsv-1716)、cgtg-102(ad5/3-d24-gmcsf)、gl-onc1、mv-nis和dnx-2401。
[0120]
在一些實施方案中，所述細胞因子選自以下的一種或多種：干擾素(ifn)-α、il-2、il-12、il-7、il-21和粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(gm-csf)。
[0121]
在一些實施方案中，所述基于細胞的免疫治療劑包括癌癥抗原特異性t細胞，任選地離體來源的t細胞。在一些實施方案中，所述癌癥抗原特異性t細胞選自以下的一種或多種：嵌合抗原受體(car)修飾的t細胞和t細胞受體(tcr)修飾的t細胞、腫瘤浸潤淋巴細胞(til)和肽誘導的t細胞。
[0122]
在一些實施方案中，所述至少一種化療劑選自以下的一種或多種：烷化劑、抗代謝物、細胞毒性抗生素、拓撲異構酶抑制劑(i型或ii型)和抗微管劑。
[0123]
在一些實施方案中：
[0124]
所述烷化劑選自以下的一種或多種：氮芥類(任選地二氯甲基二乙胺、環磷酰胺、鹽酸氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、異環磷酰胺和白消安)，亞硝基脲類(任選地n-亞硝基-n-甲基脲(mnu)、卡莫司汀(bcnu)、洛莫司汀(ccnu)、司莫司汀(meccnu)、福莫司汀和鏈脲佐菌素)，四嗪類(任選地達卡巴嗪、米托唑胺和替莫唑胺)，氮丙啶(任選地噻替派、絲裂霉素和地吖醌(azq)，順鉑及其衍生物(任選地卡鉑和奧沙利鉑)以及非經典的烷化劑(任選地丙卡巴肼和六甲蜜胺)；
[0125]
所述抗代謝物選自以下的一種或多種：抗葉酸劑(任選地甲氨蝶呤和培美曲塞)，氟嘧啶(任選地5-氟尿嘧啶和卡培他濱)，脫氧核苷類似物(任選地安西他濱、依諾他濱、阿糖胞苷、吉西他濱、地西他濱、阿扎胞苷、氟達拉濱、奈拉濱、克拉屈濱、氯法拉濱、氟達拉濱和噴司他丁)和硫代嘌呤(任選地硫鳥嘌呤和巰嘌呤)；
[0126]
所述細胞毒性抗生素選自以下的一種或多種：蒽環類抗生素(任選地阿霉素、柔紅霉素、表柔比星、伊達比星、吡柔比星、阿柔比星和米托蒽醌)，博來霉素，絲裂霉素c，米托蒽醌和放線菌素；
[0127]
所述拓撲異構酶抑制劑選自以下的一種或多種：喜樹堿、伊立替康、拓撲替康、依托泊苷、阿霉素、米托蒽醌、替尼泊苷、新生霉素、美巴龍和阿柔比星；和/或
[0128]
所述抗微管劑選自以下的一種或多種：紫杉烷(任選地紫杉醇和多西他賽)和長春花生物堿(任選地長春花堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞濱)。
[0129]
在一些實施方案中，所述至少一種激素治療劑是激素激動劑或激素拮抗劑。在一些實施方案中，所述激素激動劑選自以下的一種或多種：孕激素(孕酮)，皮質類固醇(任選地潑尼松龍、甲基潑尼松龍或地塞米松)，胰島素樣生長因子，vegf衍生的血管生成和淋巴管生成因子(任選地vegf-a、vegf-a145、vegf-a165、vegf-c、vegf-d、pigf-2)，成纖維細胞生長因子(fgf)，半乳糖凝集素，肝細胞生長因子(hgf)，血小板衍生生長因子(pdgf)，轉化生長因子(tgf)-β，雄激素，雌激素和生長抑素類似物。在一些實施方案中，所述激素拮抗劑
選自以下的一種或多種：激素合成抑制劑，任選地芳香酶抑制劑或促性腺激素釋放激素(gnrh)或其類似物，以及激素受體拮抗劑，任選地選擇性雌激素受體調節劑(serm)或抗雄激素，或針對激素受體的抗體，任選地西妥木單抗(cixutumumab)、達洛珠單抗(dalotuzumab)、芬妥木單抗(figitumumab)、加尼妥單抗(ganitumab)、艾司妥單抗(istiratumab)、羅妥木單抗(robatumumab)、培戈-阿拉賽珠單抗(alacizumab pegol)、貝伐單抗(bevacizumab)、艾蘆庫單抗(icrucumab)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、夫蘇木單抗(fresolimumab)、美替木單抗(metelimumab)、那昔妥單抗(naxitamab)、西妥昔單抗(cetuximab)、瑪汀-迪妥昔珠單抗(depatuxizumab mafodotin)、伏妥昔單抗(futuximab)、伊馬曲單抗(imgatuzumab)、恩星-拉妥昔單抗(laprituximab emtansine)、馬妥珠單抗(matuzumab)、扎妥昔單抗(modotuximab)、耐昔妥珠單抗(necitumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、帕尼單抗(panitumumab)、托木妥昔單抗(tomuzotuximab)、扎蘆木單抗(zalutumumab)、伊汀-阿普盧妥單抗(aprutumab ixadotin)、貝馬里妥珠單抗(bemarituzumab)、奧拉單抗(olaratumab)或托維妥單抗(tovetumab)。
[0130]
在一些實施方案中，所述激酶抑制劑選自以下的一種或多種：艾盧替尼(adavosertib)、阿法替尼(afanitib)、阿柏西普(aflibercept)、阿昔替尼(axitinib)、貝伐單抗、博舒替尼(bosutinib)、卡博替尼(cabozantinib)、西妥昔單抗、考比替尼(cobimetinib)、克唑替尼(crizotinib)、達沙替尼(dasatinib)、恩曲替尼(entrectinib)、厄達替尼(erdafitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、福坦替尼(fostamatinib)、吉非替尼(gefitinib)、依魯替尼(ibrutinib)、伊馬替尼(imatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、樂伐替尼(lenvatinib)、木利替尼(mubritinib)、尼羅替尼(nilotinib)、帕尼單抗、帕唑帕尼(pazopanib)、哌加他尼(pegaptanib)、帕納替尼(ponatinib)、蘭尼單抗(ranibizumab)、瑞戈非尼(regorafenib)、魯索替尼(ruxolitinib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、su6656、托法替尼(tofacitinib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、凡德他尼(vandetanib)和威羅菲尼(vemuafenib)。
[0131]
還包括治療有需要的對象中的疾病或病況的方法，其包括向所述對象施用治療組合物，所述治療組合物包含特異性結合人神經纖毛蛋白-2(nrp2)多肽的至少一種抗體或其抗原結合片段，其中所述至少一種抗體或其抗原結合片段調節(例如，干擾)所述人nrp2多肽與人組氨酰-trna合成酶(hrs)多肽的結合，所述治療組合物任選地作為本文所述的治療組合物。
[0132]
在一些實施方案中，所述疾病或病況是nrp2相關疾病或病況。在一些實施方案中，所述疾病或病況選自以下的一種或多種：癌癥和與癌癥相關的疾病和途徑，包括癌細胞生長、啟動、遷移、粘附、侵襲、化學抗性和/或轉移；與炎癥、自身免疫和相關炎性疾病相關的疾病，包括與不適當的免疫細胞活化或遷移相關的疾病，如移植物抗宿主疾病(gvhd)；與淋巴發育、淋巴管瘤、淋巴管生成和淋巴損傷相關的疾病，包括例如水腫、淋巴水腫、繼發性淋巴水腫、不適當的脂肪吸收和沉積、過量的脂肪沉積和血管通透性；與感染相關的疾病，包括潛伏感染；與過敏性病癥/疾病、過敏性反應相關的疾病，包括例如慢性阻塞性肺病(copd)、嗜中性粒細胞哮喘、抗中性粒細胞胞漿抗體(anca)相關的系統性血管炎、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、炎性小體相關的疾病和皮膚相關的嗜中性粒細胞介導的疾病如壞疽性膿皮??；與肉芽腫性炎性疾病相關的疾病，包括結節病和肉芽腫；與纖維化相關的疾
病，包括纖維化疾病、纖維化、內皮向間充質轉化(emt)和傷口愈合；與不適當的平滑肌收縮性、平滑肌補償和失調，以及不適當的血管平滑肌細胞遷移和粘附相關的疾??；與不適當的自噬、吞噬作用和胞葬作用相關的疾??；與不適當的游走細胞運動相關的疾??；與神經元疾病、周圍神經系統重塑和疼痛感知相關的疾??；以及與骨發育和骨重塑相關的疾病。
[0133]
在一些實施方案中，所述疾病是癌癥，任選地其中所述癌癥表達或過表達nrp2，任選地其中所述癌癥顯示出nrp2依賴性生長、nrp2依賴性粘附、nrp2依賴性遷移和/或nrp2依賴性侵襲。在一些實施方案中，所述癌癥表達或過表達nrp2，但基本上不表達神經纖毛蛋白-1(nrp1)。某些方法涉及用于減少或預防有需要的對象中的癌癥的復發，其中所述治療組合物的施用能夠產生對所述癌癥的免疫記憶。在一些實施方案中，所述對象患有淋巴水腫。
[0134]
某些實施方案包括向所述對象施用至少一種另外的藥劑，所述藥劑選自以下的一種或多種：癌癥免疫治療劑、化療劑、激素治療劑和激酶抑制劑。在一些實施方案中，所述至少一種抗nrp2抗體或其抗原結合片段和所述至少一種藥劑作為單獨的組合物分別施用。在一些實施方案中，所述至少一種抗nrp2抗體和所述至少一種藥劑作為同一治療組合物的一部分，任選地作為本文所述的治療組合物一起施用。在一些實施方案中，所述癌癥免疫治療劑選自以下的一種或多種：免疫檢查點調節劑、癌癥疫苗、溶瘤病毒、細胞因子和基于細胞的免疫療法。
[0135]
在一些實施方案中，所述免疫檢查點調節劑是多肽，任選的抗體或其抗原結合片段或配體、或小分子。在一些實施方案中，所述免疫檢查點調節劑包含：
[0136]
(a)抑制性免疫檢查點分子的拮抗劑；或者
[0137]
(b)刺激性免疫檢查點分子的激動劑，
[0138]
任選地其中所述免疫檢查點調節劑特異性結合所述免疫檢查點分子。
[0139]
在一些實施方案中，所述抑制性免疫檢查點分子選自以下的一種或多種：程序性死亡配體1(pd-l1)、程序性死亡1(pd-1)、程序性死亡配體2(pd-l2)、細胞毒性t淋巴細胞相關蛋白4(ctla-4)、吲哚胺2,3-雙加氧酶(ido)、色氨酸2,3-雙加氧酶(tdo)、t細胞免疫球蛋白結構域和粘蛋白結構域3(tim-3)、淋巴細胞活化基因-3(lag-3)、t細胞活化的v結構域ig抑制劑(vista)、b和t淋巴細胞弱化子(btla)、cd160、皰疹病毒進入介導子(hvem)以及具有ig和itim結構域的t細胞免疫受體(tigit)。
[0140]
在一些實施方案中：
[0141]
所述拮抗劑是pd-l1和/或pd-l2拮抗劑，其任選地選自與hvem特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、阿特朱單抗(mpdl3280a)、阿維單抗(msb0010718c)和德瓦魯單抗(medi4736)中的一種或多種，任選地其中所述癌癥選自以下的一種或多種：結腸直腸癌、黑色素瘤、乳腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌和腎細胞癌；
[0142]
所述拮抗劑是pd-1拮抗劑，其任選地選自與pd-1特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、鈉武單抗、派姆單抗、mk-3475、amp-224、amp-514pdr001和匹地利珠單抗中的一種或多種，任選地其中所述pd-1拮抗劑是納武單抗并且所述癌癥任選地選自以下的一種或多種：霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌和卵巢癌；
[0143]
所述pd-1拮抗劑是派姆單抗并且所述癌癥任選地選自以下的一種或多種：黑色素瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸癌和尿路上皮癌；
[0144]
所述拮抗劑是ctla-4拮抗劑，其任選地選自與ctla-4特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、伊匹單抗、曲美木單抗中的一種或多種，任選地其中所述癌癥選自以下的一種或多種：黑色素瘤、前列腺癌、肺癌和膀胱癌；
[0145]
所述拮抗劑是ido拮抗劑，其任選地選自與ido特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、吲哚莫德(nlg-8189)、1-甲基-色氨酸(1mt)、β-咔啉(去甲哈爾滿；9h-吡啶并[3,4-b]吲哚)，迷迭香酸和艾卡哚司他中的一種或多種，并且其中所述癌癥任選地選自以下的一種或多種：轉移性乳腺癌和腦癌，任選為多形性膠質母細胞瘤、膠質瘤、膠質肉瘤或惡性腦腫瘤；
[0146]
所述拮抗劑是tdo拮抗劑，其任選地選自與tdo特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子、680c91和lm10中的一種或多種；
[0147]
所述拮抗劑是tim-3拮抗劑，其任選地選自與tim-3特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子中的一種或多種；
[0148]
所述拮抗劑是lag-3拮抗劑，其任選地選自與lag-3特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子和bms-986016中的一種或多種；
[0149]
所述拮抗劑是vista拮抗劑，其任選地選自與vista特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子中的一種或多種；
[0150]
所述拮抗劑是btla、cd160和/或hvem拮抗劑，其任選地選自與btla、cd160和/或hvem特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子中的一種或多種；
[0151]
所述拮抗劑是tigit拮抗劑，其任選地選自與tigit特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子中的一種或多種。
[0152]
在一些實施方案中，所述刺激性免疫檢查點分子選自以下的一種或多種：ox40、cd40、糖皮質激素誘導的tnfr家族相關基因(gitr)、cd137(4-1bb)、cd27、cd28、cd226和皰疹病毒進入介導子(hvem)。
[0153]
在一些實施方案中：
[0154]
所述激動劑是ox40激動劑，其任選地選自與ox40特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、ox86、fc-ox40l和gsk3174998中的一種或多種；
[0155]
所述激動劑是cd40激動劑，其任選地選自與cd40特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、cp-870,893、達西珠單抗、chi lob 7/4、adc-1013和rhcd40l中的一種或多種，并且其中所述癌癥任選地選自以下的一種或多種：黑色素瘤、胰腺癌、間皮瘤和血液學癌癥，任選地為淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤；
[0156]
所述激動劑是gitr激動劑，其任選地選自與gitr特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、incagn01876、dta-1和medi1873中的一種或多種；
[0157]
所述激動劑是cd137激動劑，其任選地選自與cd137特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、烏托魯單抗和4-1bb配體中的一種或多種；
[0158]
所述激動劑是cd27激動劑，其任選地選自與cd27特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體、伐立魯單抗和cdx-1127(1f5)中的一種或多種；
[0159]
所述激動劑是cd28激動劑，其任選地選自與cd28特異性結合的抗體或抗原結合片段或小分子或配體和tab08中的一種或多種；和/或
[0160]
所述激動劑是hvem激動劑，其任選地選自與hvem特異性結合的抗體或抗原結合片
段或小分子或配體中的一種或多種。
[0161]
在一些實施方案中，所述癌癥疫苗選自以下的一種或多種：oncophage，人乳頭瘤病毒hpv疫苗，任選地加德西或希瑞適，乙肝疫苗，任選地engerix-b、recombivax hb或twinrix和西普魯塞-t(普羅文奇)，或者所述癌癥疫苗包含選自以下的一種或多種的癌癥抗原：人her2/neu、her1/egf受體(egfr)、her3、a33抗原，b7h3、cd5、cd19、cd20、cd22、cd23(ige受體)、mage-3、c242抗原、5t4、il-6、il-13，血管內皮生長因子vegf(例如vegf-a)vegfr-1、vegfr-2、cd30、cd33、cd37、cd40、cd44、cd51、cd52、cd56、cd74、cd80、cd152、cd200、cd221、ccr4、hla-dr、ctla-4、npc-1c、腱生蛋白、波形蛋白、胰島素樣生長因子1受體(igf-1r)、甲胎蛋白、胰島素樣生長因子1(igf-1)、碳酸酐酶9(ca-ix)、癌胚抗原(cea)、鳥苷酸環化酶c、ny-eso-1、p53、存活素、整合素αvβ3、整合素α5β1、葉酸受體1、跨膜糖蛋白nmb、成纖維細胞活化蛋白α(fap)、糖蛋白75、tag-72、muc1、muc16(或ca-125)、磷脂酰絲氨酸、前列腺特異性膜抗原(pmsa)、nr-lu-13抗原、trail-r1、腫瘤壞死因子受體超家族成員10b(tnfrsf10b或trail-r2)、slam家族成員7(slamf7)、egp40泛癌抗原、b細胞活化因子(baff)、血小板衍生生長因子受體、糖蛋白epcam(17-1a)、程序性死亡-1、蛋白二硫化物異構酶(pdi)、肝再生磷酸酶3(prl-3)、前列腺酸性磷酸酶、lewis-y抗原、gd2(在神經外胚層來源的腫瘤上表達的二唾液酸神經節苷脂)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)和間皮素，任選地其中所述對象患有包含相應癌癥抗原的癌癥或處于患有包含相應癌癥抗原的癌癥的風險中。
[0162]
在一些實施方案中，所述溶瘤病毒選自以下的一種或多種：talimogene laherparepvec(t-vec)、柯薩奇病毒a21(cavatak
tm
)、安柯瑞(h101)、pelareorep塞內加谷病毒(ntx-010)、塞內卡病毒svv-001、coload1、seprehvir(hsv-1716)、cgtg-102(ad5/3-d24-gmcsf)、gl-onc1、mv-nis和dnx-2401。
[0163]
在一些實施方案中，所述細胞因子選自以下的一種或多種：干擾素(ifn)-α、il-2、il-12、il-7、il-21和粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(gm-csf)。
[0164]
在一些實施方案中，所述基于細胞的免疫治療劑包括癌癥抗原特異性t細胞，任選地離體來源的t細胞。在一些實施方案中，所述癌癥抗原特異性t細胞選自以下的一種或多種：嵌合抗原受體(car)修飾的t細胞和t細胞受體(tcr)修飾的t細胞、腫瘤浸潤淋巴細胞(til)和肽誘導的t細胞。
[0165]
在一些實施方案中，所述至少一種化療劑選自以下的一種或多種：烷化劑、抗代謝物、細胞毒性抗生素、拓撲異構酶抑制劑(i型或ii型)和抗微管劑。
[0166]
在一些實施方案中：
[0167]
所述烷化劑選自以下的一種或多種：氮芥類(任選地二氯甲基二乙胺、環磷酰胺、鹽酸氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、異環磷酰胺和白消安)，亞硝基脲類(任選地n-亞硝基-n-甲基脲(mnu)、卡莫司汀(bcnu)、洛莫司汀(ccnu)、司莫司汀(meccnu)、福莫司汀和鏈脲佐菌素)，四嗪類(任選地達卡巴嗪、米托唑胺和替莫唑胺)，氮丙啶(任選地噻替派、絲裂霉素和地吖醌(azq)，順鉑及其衍生物(任選地卡鉑和奧沙利鉑)以及非經典的烷化劑(任選地丙卡巴肼和六甲蜜胺)；
[0168]
所述抗代謝物選自以下的一種或多種：抗葉酸劑(任選地甲氨蝶呤和培美曲塞)，氟嘧啶(任選地5-氟尿嘧啶和卡培他濱)，脫氧核苷類似物(任選地安西他濱、依諾他濱、阿
糖胞苷、吉西他濱、地西他濱、阿扎胞苷、氟達拉濱、奈拉濱、克拉屈濱、氯法拉濱、氟達拉濱和噴司他丁)和硫代嘌呤(任選地硫鳥嘌呤和巰嘌呤)；
[0169]
所述細胞毒性抗生素選自以下的一種或多種：蒽環類抗生素(任選地阿霉素、柔紅霉素、表柔比星、伊達比星、吡柔比星、阿柔比星和米托蒽醌)，博來霉素，絲裂霉素c，米托蒽醌和放線菌素；
[0170]
所述拓撲異構酶抑制劑選自以下的一種或多種：喜樹堿、伊立替康、拓撲替康、依托泊苷、阿霉素、米托蒽醌、替尼泊苷、新生霉素、美巴龍和阿柔比星；和/或
[0171]
所述抗微管劑選自以下的一種或多種：紫杉烷(任選地紫杉醇和多西他賽)和長春花生物堿(任選地長春花堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞濱)。
[0172]
在一些實施方案中，所述至少一種激素治療劑是激素激動劑或激素拮抗劑。在一些實施方案中，所述激素激動劑選自以下的一種或多種：孕激素(孕酮)，皮質類固醇(任選地潑尼松龍、甲基潑尼松龍或地塞米松)，胰島素樣生長因子，vegf衍生的血管生成和淋巴管生成因子(任選地vegf-a、vegf-a145、vegf-a165、vegf-c、vegf-d、pigf-2)，成纖維細胞生長因子(fgf)，半乳糖凝集素，肝細胞生長因子(hgf)，血小板衍生生長因子(pdgf)，轉化生長因子(tgf)-β，雄激素，雌激素和生長抑素類似物。在一些實施方案中，所述激素拮抗劑選自以下的一種或多種：激素合成抑制劑，任選地芳香酶抑制劑或促性腺激素釋放激素(gnrh)或其類似物，以及激素受體拮抗劑，任選地選擇性雌激素受體調節劑(serm)或抗雄激素，或針對激素受體的抗體，任選地西妥木單抗、達洛珠單抗、芬妥木單抗、加尼妥單抗、艾司妥單抗、羅妥木單抗、培戈-阿拉賽珠單抗、貝伐單抗、艾蘆庫單抗、雷莫蘆單抗、夫蘇木單抗、美替木單抗、那昔妥單抗、西妥昔單抗、瑪汀-迪妥昔珠單抗、伏妥昔單抗、伊馬曲單抗、恩星-拉妥昔單抗、馬妥珠單抗、扎妥昔單抗、耐昔妥珠單抗、尼妥珠單抗、帕尼單抗、托木妥昔單抗、扎蘆木單抗、伊汀-阿普盧妥單抗、貝馬里妥珠單抗、奧拉單抗或托維妥單抗。
[0173]
在一些實施方案中，所述激酶抑制劑選自以下的一種或多種：艾盧替尼、阿法替尼、阿柏西普、阿昔替尼、貝伐單抗、博舒替尼、卡博替尼、西妥昔單抗、考比替尼、克唑替尼、達沙替尼、恩曲替尼、厄達替尼、厄洛替尼、福坦替尼、吉非替尼、依魯替尼、伊馬替尼、拉帕替尼、樂伐替尼、木利替尼、尼羅替尼、帕尼單抗、帕唑帕尼、哌加他尼、帕納替尼、蘭尼單抗、瑞戈非尼、魯索替尼、索拉非尼、舒尼替尼、su6656、托法替尼、曲妥珠單抗、凡德他尼和威羅菲尼。
[0174]
在一些實施方案中，所述癌癥是原發癌。在一些實施方案中，所述癌癥是轉移癌，任選地是表達nrp2a和/或nrp2b的轉移癌。在一些實施方案中，所述癌癥選自以下的一種或多種：黑色素瘤(例如轉移性黑色素瘤)、胰腺癌、骨癌、前列腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌(nsclc)、間皮瘤、白血病(例如淋巴細胞性白血病、慢性粒細胞白血病、急性髓細胞性白血病、復發性急性髓細胞性白血病)、淋巴瘤、肝癌(肝細胞癌)、肉瘤、b細胞惡性腫瘤、乳腺癌、卵巢癌、結腸直腸癌、膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、腦膜瘤、垂體腺瘤、前庭神經鞘瘤、原發性cns淋巴瘤、原始神經外胚層腫瘤(成神經管細胞瘤)、腎癌(例如腎細胞癌)、膀胱癌、子宮癌、食道癌、腦癌、頭頸癌、宮頸癌、睪丸癌、甲狀腺癌和胃癌。在一些實施方案中，所述轉移癌選自以下的一種或多種：
[0175]
(a)已經轉移到骨、肝臟和/或肺的膀胱癌；
[0176]
(b)已經轉移到骨、腦、肝臟和/或肺的乳腺癌；
[0177]
(c)已經轉移到肝臟、肺和/或腹膜的結腸直腸癌；
[0178]
(d)已經轉移到腎上腺、骨、腦、肝臟和/或肺的腎癌；
[0179]
(e)已經轉移到腎上腺、骨、腦、肝臟和/或其它肺部位的肺癌；
[0180]
(f)已經轉移到骨、腦、肝臟、肺和/或皮膚/肌肉的黑色素瘤；
[0181]
(g)已經轉移到肝臟、肺和/或腹膜的卵巢癌；
[0182]
(h)已經轉移到肝臟、肺和/或腹膜的胰腺癌；
[0183]
(i)已經轉移到腎上腺、骨、肝臟和/或肺的前列腺癌；
[0184]
(j)已經轉移到肝臟、肺和/或腹膜的胃癌；
[0185]
(l)已經轉移到骨、肝臟和/或肺的甲狀腺癌；以及
[0186]
(m)已經轉移到骨、肝臟、肺、腹膜和/或陰道的子宮癌。
[0187]
在一些實施方案中，基于相對于健康對照或匹配的對照標準或對象群體的水平，具有結合的或游離的至少一種nrp2配體(任選地來自表n2或表n3的nrp2配體和/或來自表h1的hrs多肽)的增加的循環或血清水平，任選地約或至少約30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、3000、4000或5000pm的所述至少一種nrp2配體，或者約或至少約30-100、40-100、50-100、30-2000、40-2000、50-2000、60-2000、70-2000、80-2000、90-2000、100-2000、200-2000、300-2000、400-2000、500-2000、600-2000、700-2000、800-2000、900-2000、1000-2000、2000-3000、3000-4000或4000-5000pm的所述至少一種nrp2配體，已經選擇和/或選擇用于治療的對象。
[0188]
在一些實施方案中，基于相對于健康對照或匹配的對照標準或對象群體，患有與至少一種nrp2配體(任選地來自表n2或表n3的nrp2配體和/或來自表h1的hrs多肽)和/或其編碼mrna的增加的水平或表達相關的疾病，任選地相對于非癌性對照細胞或組織，任選地相對于與所述癌癥相同類型的非癌性細胞或組織，具有所述至少一種nrp2配體和/或其編碼mrna的增加的水平或表達的癌癥，已經選擇和/或選擇用于治療的對象，任選地其中所述hrs多肽是選自hisrs
n1
、hisrs
n2
、hisrs
n3
、hisrs
n4
、hisrs
n5
、hisrs
c1
、hisrs
c2
、hisrs
c3
、hisrs
c4
、hisrs
c5
、hisrs
c6
、hisrs
c7
、hisrs
c8
和hisrs
c9
的剪接變體。
[0189]
在一些實施方案中，基于相對于健康對照或匹配的對照標準或對象群體的水平，具有結合的或游離的可溶性神經纖毛蛋白2(nrp2)多肽(任選地選自表n1)的增加的循環或血清水平，任選地約或至少約10、20、30、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、3000、4000、5000pm的所述可溶性nrp2多肽的循環或血清水平，或者任選地約30-50、50-100、100-2000、200-2000、300-2000、400-2000、500-2000、600-2000、700-2000、800-2000、900-2000、1000-2000、2000-3000、3000-4000、4000-5000pm的所述可溶性nrp2多肽的循環或血清水平，已經選擇和/或選擇用于治療的對象。
[0190]
在一些實施方案中，基于相對于健康對照或匹配的對照標準或對象群體的水平，患有與nrp2多肽(任選地選自表n1)和/或其編碼mrna的增加的水平或表達相關的疾病，任選地相對于非癌性對照細胞或組織，任選地相對于與所述癌癥相同類型的非癌性細胞或組織，具有nrp2多肽(任選地選自表n1)和/或其編碼mrna的增加的水平或表達的癌癥，已經選擇和/或選擇用于治療的對象。
[0191]
在一些實施方案中，基于相對于健康對照或匹配的對照標準或對象群體，患有與nrp2a和/或nrp2b的增加的水平或表達或者nrp2a：nrp2b表達的改變的比率相關的疾病，已經選擇和/或選擇用于治療的對象。在一些實施方案中，與健康對照或匹配的對照標準或對象群體相比，nrp2b的水平增加約或至少約10％、20％、30％、40％、50％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％。在一些實施方案中，所述健康對照或匹配的對照標準或對象群體包括與所述癌癥相同類型的癌性或非癌性細胞或組織的年齡匹配樣品的平均范圍，其包括特定特性，如耐藥性，轉移潛力，侵襲性，遺傳特征(任選地p53突變、pten缺失、igfr表達)和/或表達模式。在一些實施方案中，基于相對于健康或匹配的對照標準或對象群體具有hrs:nrp2復合物的增加的循環水平，已經選擇和/或選擇用于治療的對象。
[0192]
某些實施方案包括以足以實現約或小于約500pm、400pm、300pm、200pm、100pm、50pm、40pm、30pm、20pm或10pm的可溶性nrp2多肽的平均持續血清或循環水平的量和頻率施用所述至少一種抗nrp2抗體。某些實施方案包括以足以實現hrs:nrp2復合物的循環水平降低，任選地約或至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、95、99或100％的降低的量和頻率施用所述至少一種抗nrp2抗體。
[0193]
在一些實施方案中，相對于對照，所述至少一種抗nrp2抗體將對所述癌癥的免疫應答增強約或至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000％或更多。在一些實施方案中，相對于未處理的對照，所述至少一種抗nrp2抗體將所述癌癥的體外生長速率降低約或至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000％或更多。在一些實施方案中，相對于未處理的對照，所述至少一種抗nrp2抗體將所述癌癥對基質的體外粘附性降低約或至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000％或更多，任選地其中所述基質包含層粘連蛋白。
[0194]
在一些實施方案中，相對于未處理的對照，所述至少一種抗nrp2抗體將所述癌癥的侵襲性降低約或至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000％或更多。在一些實施方案中，相對于未處理的對照，所述至少一種抗nrp2抗體將所述癌癥的遷移速率或運動速率抑制約或至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000％或更多。在一些實施方案中，相對于未處理的對照，所述至少一種抗nrp2抗體將所述癌癥或相關免疫細胞的自噬或內體成熟(任選地內體酸化)的速率抑制約或至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000％或更多。在一些實施方案中，相對于單獨的另外的藥劑，所述至少一種抗nrp2抗體將所述癌癥對所述另外的藥劑的敏感性增強約或至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000％或更多，所述另外的藥劑選自以下的一種或多種：化療劑、激素治療劑和激酶抑制劑。在一些實施方案中，相對于單獨的所述癌癥免疫治療劑，所述至少一種抗nrp2抗體將所述癌癥免疫治療劑的抗腫瘤和/或免疫刺激活性增強約或至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000％或更多。
[0195]
某些實施方案包括以足以實現約1nm至約1μm、約1nm至約100nm、約1nm至約10nm或約1nm至約3μm的所述至少一種抗nrp2抗體的穩態濃度或平均循環濃度的量和頻率施用所述至少一種抗nrp2抗體。
[0196]
還包括患者護理試劑盒，其包含：
[0197]
(a)特異性結合人神經纖毛蛋白-2(nrp2)多肽的至少一種抗體或其抗原結合片段；以及任選地
[0198]
(b)至少一種另外的藥劑，其選自癌癥免疫治療劑、化療劑、激素治療劑和激酶抑制劑。
[0199]
在一些實施方案中，(a)和(b)在單獨的治療組合物中。在一些實施方案中，(a)和(b)在同一治療組合物中。在一些實施方案中，所述至少一種化療劑選自以下的一種或多種：烷化劑、抗代謝物、細胞毒性抗生素、拓撲異構酶抑制劑(i型或ii型)和抗微管劑。
[0200]
在一些實施方案中：
[0201]
所述烷化劑選自以下的一種或多種：氮芥類(任選地二氯甲基二乙胺、環磷酰胺、鹽酸氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、異環磷酰胺和白消安)，亞硝基脲類(任選地n-亞硝基-n-甲基脲(mnu)、卡莫司汀(bcnu)、洛莫司汀(ccnu)、司莫司汀(meccnu)、福莫司汀和鏈脲佐菌素)，四嗪類(任選地達卡巴嗪、米托唑胺和替莫唑胺)，氮丙啶(任選地噻替派、絲裂霉素和地吖醌(azq)，順鉑及其衍生物(任選地卡鉑和奧沙利鉑)以及非經典的烷化劑(任選地丙卡巴肼和六甲蜜胺)；
[0202]
所述抗代謝物選自以下的一種或多種：抗葉酸劑(任選地甲氨蝶呤和培美曲塞)，氟嘧啶(任選地5-氟尿嘧啶和卡培他濱)，脫氧核苷類似物(任選地安西他濱、依諾他濱、阿糖胞苷、吉西他濱、地西他濱、阿扎胞苷、氟達拉濱、奈拉濱、克拉屈濱、氯法拉濱、氟達拉濱和噴司他丁)和硫代嘌呤(任選地硫鳥嘌呤和巰嘌呤)；
[0203]
所述細胞毒性抗生素選自以下的一種或多種：蒽環類抗生素(任選地阿霉素、柔紅霉素、表柔比星、伊達比星、吡柔比星、阿柔比星和米托蒽醌)，博來霉素，絲裂霉素c，米托蒽醌和放線菌素；
[0204]
所述拓撲異構酶抑制劑選自以下的一種或多種：喜樹堿、伊立替康、拓撲替康、依托泊苷、阿霉素、米托蒽醌、替尼泊苷、新生霉素、美巴龍和阿柔比星；和/或
[0205]
所述抗微管劑選自以下的一種或多種：紫杉烷(任選地紫杉醇和多西他賽)和長春花生物堿(任選地長春花堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞濱)。
[0206]
在一些實施方案中，所述至少一種激素治療劑是激素激動劑或激素拮抗劑。在一些實施方案中，所述激素激動劑選自以下的一種或多種：孕激素(孕酮)，皮質類固醇(任選地潑尼松龍、甲基潑尼松龍或地塞米松)，胰島素樣生長因子，vegf衍生的血管生成和淋巴管生成因子(任選地vegf-a、vegf-a145、vegf-a165、vegf-c、vegf-d、pigf-2)，成纖維細胞生長因子(fgf)，半乳糖凝集素，肝細胞生長因子(hgf)，血小板衍生生長因子(pdgf)，轉化生長因子(tgf)-β，雄激素，雌激素和生長抑素類似物。在一些實施方案中，所述激素拮抗劑選自以下的一種或多種：激素合成抑制劑，任選地芳香酶抑制劑或促性腺激素釋放激素(gnrh)或其類似物，以及激素受體拮抗劑，任選地選擇性雌激素受體調節劑(serm)或抗雄激素，或針對激素受體的抗體，任選地西妥木單抗、達洛珠單抗、芬妥木單抗、加尼妥單抗、艾司妥單抗、羅妥木單抗、培戈-阿拉賽珠單抗、貝伐單抗、艾蘆庫單抗、雷莫蘆單抗、夫蘇木
單抗、美替木單抗、那昔妥單抗、西妥昔單抗、瑪汀-迪妥昔珠單抗、伏妥昔單抗、伊馬曲單抗、恩星-拉妥昔單抗、馬妥珠單抗、扎妥昔單抗、耐昔妥珠單抗、尼妥珠單抗、帕尼單抗、托木妥昔單抗、扎蘆木單抗、伊汀-阿普盧妥單抗、貝馬里妥珠單抗、奧拉單抗或托維妥單抗。
[0207]
在一些實施方案中，所述激酶抑制劑選自以下的一種或多種：艾盧替尼、阿法替尼、阿柏西普、阿昔替尼、貝伐單抗、博舒替尼、卡博替尼、西妥昔單抗、考比替尼、克唑替尼、達沙替尼、恩曲替尼、厄達替尼、厄洛替尼、福坦替尼、吉非替尼、依魯替尼、伊馬替尼、拉帕替尼、樂伐替尼、木利替尼、尼羅替尼、帕尼單抗、帕唑帕尼、哌加他尼、帕納替尼、蘭尼單抗、瑞戈非尼、魯索替尼、索拉非尼、舒尼替尼、su6656、托法替尼、曲妥珠單抗、凡德他尼和威羅菲尼。
[0208]
本文還包括生物測定系統，其包含基本上純的抗nrp2抗體或其抗原結合片段(任選地如本文所定義的)以及在細胞表面上表達人nrp2多肽的宿主細胞系。在一些實施方案中，用可檢測標記物標記所述nrp2多肽。在一些實施方案中，用可檢測標記物標記所述抗nrp2抗體。在一些實施方案中，所述nrp2多肽功能性地偶聯至讀出器或指示劑，如所述nrp2多肽的生物活性的熒光或發光指示劑。在一些實施方案中，所述nrp2多肽選自表n1。某些生物測定系統包含至少一種nrp2配體(任選地選自表n2或表n3的nrp2配體和/或選自表h1的人組氨酰-trna合成酶(hrs)多肽)，任選地其中所述宿主細胞表達所述至少一種nrp2配體。在一些實施方案中，所述hrs多肽選自表h1，任選地其中所述hrs多肽包含任選地選自hisrs
n1
、hisrs
n2
、hisrs
n3
、hisrs
n4
、hisrs
n5
、hisrs
c1
、hisrs
c2
、hisrs
c3
、hisrs
c4
、hisrs
c5
、hisrs
c6
、hisrs
c7
、hisrs
c8
和hisrs
c9
的hrs剪接變體。在一些實施方案中，所述至少一種nrp2配體選自表n2或表n3。
[0209]
本文還包括檢測系統，其包括表達人神經纖毛蛋白2(nrp2)多肽的細胞，至少一種nrp2配體(任選地選自表n2或表n3的重組nrp2配體和/或選自表h1的人組氨酰-trna合成酶(hrs)多肽)以及任選地如本文所定義的調節所述nrp2多肽與所述至少一種nrp2配體之間的相互作用的人或人源化抗nrp2抗體或其抗原結合片段。在一些實施方案中，用可檢測標記物標記所述抗nrp2抗體。在一些實施方案中，所述nrp2多肽選自表n1。在一些實施方案中，所述hrs多肽包含選自表h1，任選地選自hisrs
n1
、hisrs
n2
、hisrs
n3
、hisrs
n4
、hisrs
n5
、hisrs
c1
、hisrs
c2
、hisrs
c3
、hisrs
c4
、hisrs
c5
、hisrs
c6
、hisrs
c7
、hisrs
c8
和hisrs
c9
的hrs剪接變體。在一些實施方案中，所述至少一種nrp2配體選自表n2或表n3。在一些實施方案中，所述nrp2多肽和/或所述至少一種nrp2配體功能性地偶聯至讀出器或指示劑，如所述nrp2多肽或所述至少一種nrp2配體的生物活性的熒光或發光指示劑。
[0210]
還包括診斷系統，其包括包含神經纖毛蛋白2(nrp2)多肽的細胞和特異性結合所述nrp2多肽(任選地選自表n2或表n3的nrp2配體和/或選自表h1的人組氨酰-trna合成酶(hrs)多肽)的至少一種nrp2配體，其中所述細胞包含指示分子，所述指示分子指示響應于與所述至少一種nrp2配體的相互作用的所述nrp2多肽的水平或活性的變化。
[0211]
還包括細胞組合物，其包含工程化的細胞群體，其中至少一個細胞包含編碼如本文所定義的人或人源化抗nrp2抗體或其抗原結合片段的一個或多個多核苷酸，其中所述細胞能夠在無血清培養基中生長。
[0212]
還包括細胞生長裝置，其包含如本文所定義的人或人源化抗nrp2抗體或其抗原結合片段；工程化的細胞群體，其中至少一個細胞包含編碼所述抗nrp2抗體或其抗原結合片
段的一個或多個多核苷酸；至少約10升的無血清生長培養基和無菌容器。
[0213]
附圖簡述
[0214]
圖1a-1b說明了神經纖毛蛋白的一般結構域結構(1a)和示例性神經纖毛蛋白共受體功能(1b)。
[0215]
圖2a-2b說明了nrp2同種型的結構域結構和示例性nrp2配體結合結構域。所有的nrp2同種型在mam結構域中是相同的，此后是編碼genfk的短的可能保留的內含子。然后存在兩種可能的剪接框架(形式a和b)，這些編碼不同的近膜結構域、跨膜螺旋和胞質結構域。在第一個中，存在去除17個氨基酸的選擇性剪接受體(變體3或形式c)。每種形式與膜具有不同的間隔，這可能影響共受體特異性。a/c和b形式也具有不同的跨膜結構域，其中a/c形式含有二聚化基序(gxxxg)。
[0216]
圖3顯示了抗nrp2抗體與表達人nrp2的克隆expi293細胞的結合。將四種抗nrp2抗體和同種型對照抗體(人igg4)以所示濃度加入到表達人nrp2的細胞中，并如實施例中所述通過facs分析測定細胞結合。
[0217]
圖4顯示了抗nrp2抗體與表達獼猴nrp2的克隆expi293細胞的結合。將四種抗nrp2抗體和同種型對照抗體(人igg4)以所示濃度加入到表達獼猴nrp2的細胞中，并如實施例中所述通過facs分析測定細胞結合。
[0218]
圖5a-5b顯示了在存在和不存在vegf-a的情況下，抗nrp2抗體對nrp2與kdr的受體二聚化的影響。如實施例中所述，在受體二聚化測定中評估指示的抗體。5a顯示了將每個單獨孔的標準化響應計算到添加配體之前的時間點，然后標準化至無抗體/無配體(基線信號)。然后處理重復以給出平均響應和標準偏差。5b顯示了在80分鐘時的凈效應。
[0219]
圖6a-6b顯示了在存在和不存在vegf-c的情況下，抗nrp2抗體對nrp2與flt4的受體二聚化的影響。如實施例中所述，在受體二聚化測定中評估指示的抗體。6a顯示了將每個單獨孔的標準化響應計算到添加配體之前的時間點，然后標準化至無抗體/無配體(基線信號)。然后處理重復以給出平均響應和標準偏差。6b顯示了在80分鐘時的凈效應。
[0220]
圖7a-7b顯示了在存在和不存在sema 3f的情況下，抗nrp2抗體對nrp2與plxna1的受體二聚化的影響。如實施例中所述，在受體二聚化測定中評估指示的抗體。7a顯示了將每個單獨孔的標準化響應計算到添加配體之前的時間點，然后標準化至無抗體/無配體(基線信號)。然后處理重復以給出平均響應和標準偏差。7b顯示了在80分鐘時的凈效應。
[0221]
圖8a-8b顯示了在存在和不存在vegf-a的情況下，抗nrp2抗體對nrp2與kdr的受體二聚化的影響。如實施例中所述，在受體二聚化測定中評估指示的抗體。8a顯示了將每個單獨孔的標準化響應計算到添加配體之前的時間點，然后標準化至無抗體/無配體(基線信號)。然后處理重復以給出平均響應和標準偏差。8b顯示了在80分鐘時的凈效應。
[0222]
圖9a-9b顯示了在存在和不存在vegf-c的情況下，抗nrp2抗體對nrp2與flt4的受體二聚化的影響。如實施例中所述，在受體二聚化測定中評估指示的抗體。9a顯示了將每個單獨孔的標準化響應計算到添加配體之前的時間點，然后標準化至無抗體/無配體(基線信號)。然后處理重復以給出平均響應和標準偏差。9b顯示了在80分鐘時的凈效應。
[0223]
圖10a-10b顯示了在存在和不存在sema 3f的情況下，抗nrp2抗體對nrp2與plxn a1的受體二聚化的影響。如實施例中所述，在受體二聚化測定中評估指示的抗體。10a顯示了將每個單獨孔的標準化響應計算到添加配體之前的時間點，然后標準化至無抗體/無配
體(基線信號)。然后處理重復以給出平均響應和標準偏差。10b顯示了在80分鐘時的凈效應。
[0224]
圖11a-11b顯示了抗體結合過表達nrp2的expi293細胞的測量。11a顯示了用小鼠/人反應性對照抗體染色的mfi分布的實例，其中未轉染的細胞直方圖以淺灰色顯示，而過表達小鼠nrp2i383v變體的細胞以深灰色顯示。顯示了針對過表達nrp2的細胞的設門。11b顯示了在10nm的人和小鼠野生型nrp2和含有代表人殘基的單獨突變的小鼠nrp2受體下的anrp2-10v10的mfi染色的圖。
[0225]
圖12顯示了來自pbd文件2qqk的人nrp2b1結構域的結構。展示了顯示氨基酸280-426的帶狀圖。殘基299y、354n、416s和319t的側鏈以白色突出顯示。以埃計的299y、354n和416s的α碳之間的距離沿虛線顯示。
[0226]
圖13a-13b顯示了在3d軟瓊脂集落形成測定中抗nrp2抗體對三陰性乳腺癌細胞(tnbc)中的錨定非依賴性生長和對化療劑的敏感性的抑制作用。對于用與化療藥物-順鉑或5-fu組合的100nm的a-nrp2-10v10對比同種型對照higg4處理的tnbc細胞mda-mb-231(13a)或bt549(13b)，集落形成測定的熒光讀數顯示為具有平均值
±
sem的點圖。統計顯著性用星號表示(*《0.05，**《0.01，****《0.0001，通過學生t檢驗)。在這兩種情況下，抗nrp2抗體與順鉑或5-fu組合的抗腫瘤作用顯著更明顯。
[0227]
圖14顯示了在3d甲基纖維素集落形成測定中抗nrp2抗體與化療劑和vegf-a抗體藥物(貝伐單抗)的組合對tnbc mda-mb-231細胞的錨定非依賴性生長的抑制作用。對于用與化療藥物-順鉑(2個劑量)或貝伐單抗(100nm)組合的100nm的a-nrp2-10v10對比同種型對照higg4處理的tnbc細胞mda-mb-231，集落形成測定的發光讀數顯示為具有平均值
±
sem的點圖。統計顯著性用星號表示(**p《0.01,***p《0.001,****p《0.0001，通過學生t檢驗)。
[0228]
圖15顯示了抗體anrp2-10v10和anrp2-11v7對人淋巴內皮細胞(hlec)向血管內皮生長因子c(vegf-c)遷移的抑制。hlec被兩種nrp2抗體抑制至與分別針對vegfr2或vegfr3的陽性對照抗體(αkdr或3c5)一致的水平。
[0229]
圖16顯示了用抗體anrp2-14v10(nrp2_14)或anrp2-11v7(nrp2_11)處理細胞阻斷了u251膠質母細胞瘤細胞中臂板蛋白3f處理后磷酸化-akt水平的降低。用sema3f處理u251細胞導致細胞內磷酸化-akt水平降低大約50％，其可被nrp2_11和nrp2_14阻斷，但不被vegf-c封閉抗體anrp2-10v10或不被migg1和higg4對照抗體阻斷。
[0230]
圖17顯示了經由nrp2的sema3f信號傳導的示意圖。用sema3f處理導致阻斷pi3k活性并由此降低磷酸化-akt水平。
[0231]
圖18顯示了抗體anrp2-14v10和anrp22-11v7，但不是anrp2-10v10，阻斷臂板蛋白3f介導的akt磷酸化的抑制。用sema3f處理u251細胞導致細胞內磷酸化-akt水平降低大約50％，其可被臂板蛋白封閉抗體anrp2-11v7和anrp2-14v10阻斷，但不被vegf-c封閉抗體anrp2-10v10或不被migg1和higg4對照抗體阻斷。
[0232]
圖19a-19b顯示了小鼠替代vegf封閉抗體anrp2-28抑制鼠黑色素瘤模型(b16.f10)中的腫瘤生長。將攜帶b16-f10腫瘤并且用三個劑量的小鼠替代抗體anrp2-28(其識別小鼠nrp2(并且是抗人nrp2抗體anrp2-10v10的功能性替代物))處理的動物。圖19a顯示了與igg對照組(黑色正方形)相比，用小鼠替代抗體anrp2-28(灰色三角形)處理顯示腫瘤生長抑制，并且在第14天、第16天和第19天貝伐單抗(黑色三角形)達到統計顯著性(p《
0.05)。圖19b顯示了每個處理組的最終腫瘤重量。
[0233]
圖20a-20b顯示了vegf阻斷劑(anrp2-28)在自發轉移模型(4t1)中的抗轉移作用。圖20a顯示了攜帶4t1腫瘤并且用小鼠替代抗體anrp2-28處理的動物在終止時顯示肺中轉移性結節的減少，與igg對照(黑色柱狀圖)相比達到統計顯著性(p≤0.05)。圖20b顯示了血清抗體濃度對比肺轉移數量，證明了最終抗體濃度與轉移性結節數量之間的線性關系。
[0234]
圖21顯示了vegf阻斷劑(anrp2-10v10/anrp2-28)與順鉑的組合在tnbc異種移植模型(mda-mb-231)中的協同作用。在順鉑處理方案中加入匯集的抗nrp2抗體(黑色符號)從接種后第40天開始增加了順鉑的腫瘤抑制作用，與對照動物(灰色符號)相比，在第60天達到統計顯著性。
[0235]
圖22顯示了vegf阻斷劑(anrp2-10v10)增強了nsclc異種移植模型(a549)中化療藥物5-fu的活性。5-fu和αnrp2-10的組合(黑色符號)表現優于5-fu和對照igg(灰色符號)，證明了靶向nrp2增加了化療藥物5-fu在nsclc的本領域接受的模型中的功效。在細胞接種后第51天達到統計上顯著的差異。
[0236]
圖23a-23b顯示了vegf阻斷劑(anrp2-28)抑制角膜損傷的動物模型中新淋巴管生成。圖23a顯示了igg對照和anrp2-28組的lyve-1(淋巴管生成標志物)染色的角膜的代表性圖像掃描。繪制每個處理組的％lye-1
+
面積的平均值。圖23b顯示了與igg對照組相比，在anrp2-10處理組中淋巴管萌發減少的明顯趨勢。
[0237]
發明詳述
[0238]
除非另有定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本公開內容所屬領域的普通技術人員通常理解的相同的含義。盡管與本文描述的那些類似或等同的任何方法、材料、組合物、試劑、細胞可用于實踐或測試本公開內容的主題，但描述了優選的方法和材料。本說明書中引用的所有出版物和參考文獻(包括但不限于專利和專利申請)通過引用以其整體并入本文，如同每個單獨的出版物或參考文獻被具體地和單獨地指示為如完全闡述地一樣通過引用并入本文一樣。本技術要求優先權的任何專利申請也以上文針對出版物和參考文獻所述的方式通過引用以其整體并入本文。
[0239]
標準技術可用于重組dna、寡核苷酸合成以及組織培養和轉化(例如，電穿孔、脂質轉染)。酶促反應和純化技術可以根據制造商的說明書或如本領域通常實現的或如本文所述進行。這些和相關的技術和程序通?？梢愿鶕绢I域眾所周知的常規方法，并且如在整個本說明書中引用和論述的各種一般和更具體的參考文獻中所述進行。除非提供具體的定義，否則與本文所述的分子生物學、分析化學、合成有機化學以及藥用和藥物化學相關使用的命名法以及本文所述的分子生物學、分析化學、合成有機化學以及藥用和藥物化學的實驗室程序和技術是本領域眾所周知和常用的那些。標準技術可用于重組技術、分子生物學、微生物學、化學合成、化學分析、藥物制備、制劑和遞送以及患者的治療。
[0240]
為了本公開內容的目的，下面定義了以下術語。
[0241]
冠詞“一個/一種(a)”和“一個/一種(an)”在本文用于指所述冠詞的一個或多于一個/一種或多于一種(即，至少一個/種)的語法對象。例如，“一個元件”包括“一個元件”、“一個或多個元件”和/或“至少一個元件”。
[0242]“約”意指量、水平、值、數字、頻率、百分比、大小、尺寸、數量、重量或長度相對于參考量、水平、值、數字、頻率、百分比、大小、尺寸、數量、重量或長度變化多達30％、25％、
20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。
[0243]
術語“抗原”是指能夠與選擇性結合劑如抗體結合，并且另外能夠用于動物中以產生能夠與該抗原的表位結合的抗體的分子或分子的一部分?？乖梢跃哂幸粋€或多個表位。如本文所用，術語“抗原”包括在適當條件下能夠誘導對物質的免疫應答并且能夠與免疫應答的產物反應的物質。例如，抗原可以被抗體(體液免疫應答)或致敏t淋巴細胞(t輔助細胞或細胞介導的免疫應答)或兩者識別?？乖梢允强扇苄晕镔|(如毒素和外源蛋白)或顆粒(如細菌和組織細胞)；然而，只有蛋白質或多糖分子的被稱為抗原決定簇(表位)的部分與抗體或淋巴細胞上的特定受體結合。更廣泛地，術語“抗原”包括抗體所結合的或抗體所期望的任何物質，而不管該物質是否是免疫原性的。對于此類抗原，抗體可以通過重組方法進行鑒定，而與任何免疫應答無關。
[0244]“拮抗劑”是指干擾或以其它方式降低另一種藥劑或分子的生理作用的生物結構或化學藥劑。在一些情況下，拮抗劑特異性結合其它藥劑或分子。包括完全拮抗劑和部分拮抗劑。
[0245]“激動劑”是指增加或增強另一藥劑或分子的生理作用的生物結構或化學藥劑。在一些情況下，激動劑特異性結合其它藥劑或分子。包完括全激動劑和部分激動劑。
[0246]
術語“無反應性(anergy)”是指t細胞或b細胞對抗原進行的再刺激的應答的功能性失活。
[0247]
如本文所用，術語“氨基酸”旨在意指天然存在的和非天然存在的氨基酸以及氨基酸類似物和模擬物。例如，天然存在的氨基酸包含在蛋白質生物合成期間使用的20種(l)-氨基酸以及其它氨基酸，如4-羥脯氨酸、羥賴氨酸、鎖鏈素、異鎖鏈素、高半胱氨酸、瓜氨酸和鳥氨酸。非天然存在的氨基酸包含例如本領域技術人員已知的(d)-氨基酸、正亮氨酸、正纈氨酸、對氟苯丙氨酸、乙硫氨酸等。氨基酸類似物包含天然和非天然存在的氨基酸的修飾形式。此類修飾可以包含例如氨基酸上的化學基團和部分的取代或替代或者氨基酸的衍生化。氨基酸模擬物包含例如表現出參考氨基酸的諸如電荷和電荷間隔特點的功能上類似特性的有機結構。例如，模擬精氨酸(arg或r)的有機結構將具有位于類似分子空間中并且具有與天然存在的arg氨基酸的側鏈的e-氨基相同遷移度的正電荷部分。模擬物還包含受約束的結構，以便維持氨基酸或氨基酸官能團的最佳間隔和電荷相互作用。本領域的技術人員已知或可以確定哪些結構構成功能上等同的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。
[0248]
如本文所用，術語“抗體”不僅涵蓋完整的多克隆或單克隆抗體，而且還涵蓋其片段(如dab、fab、fab'、f(ab')2、fv)、單鏈(scfv)、其合成變體、天然存在的變體、包括具有所需特異性的抗原結合片段的抗體部分的融合蛋白、人源化抗體、嵌合抗體以及免疫球蛋白分子的包含具有所需特異性的抗原結合位點或片段(表位識別位點)的任何其它修飾構型。本文更加詳細地描述了抗體(及其抗原結合片段)的某些特征和特點。
[0249]
抗體或抗原結合片段基本上可以是任何類型。如本領域中所眾所周知的，抗體是能夠通過位于免疫球蛋白分子的可變區中的至少一個表位識別位點與諸如免疫檢查點分子的靶標特異性結合的免疫球蛋白分子。
[0250]
如本文所用的術語“抗原結合片段”是指含有免疫球蛋白重鏈和/或輕鏈的與目的抗原結合的至少一個cdr的多肽片段。在此方面，本文所述抗體的抗原結合片段可以包括來自結合靶分子的抗體的vh和v
l
序列中的1個、2個、3個、4個、5個或所有6個cdr。
[0251]
可以使用本領域眾所周知的方法對抗體及其抗原結合片段的結合特性進行定量(參見davies等人,annual rev.biochem.59:439-473,1990)。在一些實施方案中，抗體或其抗原結合片段以約或范圍為約≤10-7
m到約10-8
m的平衡解離常數與靶分子(例如，nrp2多肽或其表位或復合物)特異性結合。在一些實施方案中，平衡解離常數為約或范圍為約≤10-9
m到約≤10-10
m。在某些說明性實施方案中，抗體或其抗原結合片段對靶分子(抗體或其抗原結合片段所特異性結合的)的親和力(kd或ec
50
)為約、至少約或小于約0.01nm、0.05nm、0.1nm、0.2nm、0.3nm、0.4nm、0.5nm、0.6nm、0.7nm、0.8nm、0.9nm、1nm、2nm、3nm、4nm、5nm、6nm、7nm、8nm、9nm、10nm、11nm、12nm、13nm、14nm、15nm、16nm、17nm、18nm、19nm、20nm、21nm、22nm、23nm、24nm、25nm、26nm、27nm、28nm、29nm、30nm、40nm或50nm。
[0252]
如果與諸如多肽或抗體的分子與替代性細胞或物質或表位反應或締合相比，所述分子更頻繁地、更快速地、以更長的持續時間和/或以更高的親和力與特定細胞、物質或特定表位反應或締合，則所述分子被稱為表現出“特異性結合”或“優先結合”。如果與抗體以例如統計上顯著的量與其它物質或表位結合相比，所述抗體以更高的親和力、更高的親合力、更容易地和/或以更長的持續時間進行結合，則所述抗體“特異性結合”或“優先結合”靶分子或表位。通常，表現出特異性結合的分子對中的一個成員在其表面上具有區域或具有腔，其與分子對的另一成員的特定空間和/或極性組織特異性結合并因此與其互補。因此，該對的成員具有彼此特異性結合的特性。例如，與特定表位特異性或優先結合的抗體是這樣的抗體：與所述抗體與其它表位的結合相比，所述抗體以更高的親和力、以更高的親合力、更容易地和/或以更長的持續時間與特定表位結合。通過閱讀此定義還應理解，例如，與第一靶標特異性或優先結合的抗體(或部分或表位)可以或可以不與第二靶標特異性或優先結合。所述術語還適用于例如抗體對由多種抗原攜帶的特定表位具有特異性的情況，在這種情況下，攜帶抗原結合片段或結構域的特定結合成員將能夠結合攜帶表位的各種抗原；例如，其可以對來自共有共同表位的多種物種的靶抗原的多種不同形式具有交叉反應性。
[0253]
免疫結合通常是指在免疫球蛋白分子與免疫球蛋白對其具有特異性的抗原之間發生的類型，例如舉例來說但不限于由于靜電、離子、親水和/或疏水吸引或排斥、位阻力、氫鍵結合、范德華力和其它相互作用而導致的非共價相互作用?？梢杂妹庖呓Y合相互作用的解離常數(kd)來表示相互作用的強度或親和力，其中kd越小代表親和力越大?？梢允褂帽绢I域中眾所周知的方法對所選多肽的免疫結合特性進行定量。一種此類方法需要測量抗原結合位點/抗原復合物形成和解離的速率，其中那些速率取決于復合物配偶體的濃度、相互作用的親和力并且取決于在兩個方向上同等地影響速率的幾何參數。因此，可以通過計算締合和解離的濃度和實際速率來測定“締合速率常數”(kon)和“解離速率常數”(koff)。koff/kon的比率能夠消除與親和力無關的所有參數，因此等于解離常數kd。如本文所用，術語“親和力”包含兩種藥劑的可逆結合的平衡常數，并且表示為kd或ec
50
。結合蛋白與配體的親和力，如抗體對表位的親和力可以為例如約100納摩爾(nm)至約0.1nm、約100nm到約1皮摩爾(pm)或約100nm至約1飛摩爾(fm)。如本文所用，術語“親合力”是指兩種或更多種藥劑的復合物在稀釋后對解離的抗性。在一些實施方案中，親和力以半數最大有效濃度(ec
50
)來表示，所述半數最大有效濃度是指如本文所公開的藥劑(如抗體或抗nrp2抗體)在指定的暴露時間后誘導基線與最大值之間的在中間的應答的濃度。ec
50
通常用作抗體的效力的度量。
[0254]
可以通過本領域普通技術人員已知的多種技術中的任一種來制備抗體。參見例如harlow和lane,antibodies:a laboratory manual,cold spring harbor laboratory,1988?？梢岳缡褂胟ohler和milstein,eur.j.immunol.6:511-519,1976的技術以及對其的改進來制備對目的多肽具有特異性的單克隆抗體。還包括利用諸如小鼠的轉基因動物來表達人抗體的方法。參見例如neuberger等人,nature biotechnology 14:826,1996；lonberg等人,handbook of experimental pharmacology113:49-101,1994；以及lonberg等人,internal review of immunology13:65-93,1995。特定實例包括的平臺(參見例如美國專利第6,596,541號)。
[0255]
還可以通過使用噬菌體展示或酵母展示文庫產生或鑒定抗體(參見例如美國專利第7,244,592號；chao等人,nature protocols.1:755-768,2006)?？捎梦膸斓姆窍拗菩詫嵗寺∥膸旎蚝铣晌膸?，如人組合抗體文庫(hucal)，其中人抗體庫的結構多樣性由七個重鏈可變區基因和七個輕鏈可變區基因表示。這些基因的組合產生主文庫中的49個框架。通過在這些框架上疊加高度可變的基因盒(cdr＝互補決定區)，可以復制龐大的人抗體庫。還包括設計有編碼輕鏈可變區、重鏈cdr-3的人供體來源的片段、編碼重鏈cdr-1中的多樣性的合成dna以及編碼重鏈cdr-2中的多樣性的合成dna的人文庫。適合使用的其它文庫對于本領域的技術人員而言將是顯而易見的。
[0256]
在某些實施方案中，如本文所述的抗體及其抗原結合片段包含分別插入在重鏈與輕鏈框架區(fr)組之間的重鏈和輕鏈cdr組，所述重鏈和輕鏈框架區(fr)組向cdr提供支持并且限定cdr相對于彼此的空間關系。如本文所用，術語“cdr組”是指重鏈或輕鏈v區的三個高變區。從重鏈或輕鏈的n端開始，這些區分別被表示為“cdr1”、“cdr2”和“cdr3”。因此，抗原結合位點包含六個cdr，其包括來自重鏈和輕鏈v區中的每一個的cdr組。包括單個cdr(例如，cdr1、cdr2或cdr3)的多肽在本文中被稱為“分子識別單元”。對多種抗原-抗體復合物的晶體學分析已經表明，cdr的氨基酸殘基形成與所結合抗原的廣泛接觸，其中最廣泛的抗原接觸是與重鏈cdr3的抗原接觸。因此，分子識別單元主要負責抗原結合位點的特異性。
[0257]
如本文所用，術語“fr組”是指構成重鏈或輕鏈v區的cdr組中的cdr的四個側翼氨基酸序列。一些fr殘基可接觸結合的抗原；然而，fr主要負責將v區折疊成抗原結合位點，特別是直接鄰近cdr的fr殘基。在fr內，某些氨基殘基和某些結構特征是非常高度保守的。在這方面，所有v區序列均含有約90個氨基酸殘基的內部二硫化物環。當v區折疊成結合位點時，cdr被展示為形成抗原結合表面的突出的環基序。通常認為存在fr的保守結構區，所述保守結構區影響cdr環轉向某些“經典”結構的折疊形狀——無論精確的cdr氨基酸序列如何。此外，已知某些fr殘基參與使抗體重鏈和輕鏈的相互作用穩定的非共價結構域間接觸。
[0258]
可以通過參考kabat,e.a等人,sequences of proteins of immunological interest.4th edition.us department of health and human services.1987及其更新來測定免疫球蛋白可變結構域的結構和位置。
[0259]
還包含“單克隆”抗體，其是指均質的抗體群，其中單克隆抗體包含參與表位的選擇性結合的氨基酸(天然存在的和非天然存在的)。單克隆抗體具有高度特異性，針對單一表位。術語“單克隆抗體”不僅涵蓋完整的單克隆抗體和全長單克隆抗體，而且還涵蓋其片段(如fab、fab'、f(ab')2、fv)、單鏈(scfv)、其變體、包含抗原結合部分的融合蛋白、人源化單克隆抗體、嵌合單克隆抗體以及免疫球蛋白分子的包括具有所需特異性的抗原結合片段
(表位識別位點)并且能夠結合表位的任何其它修飾的構型。不旨在限制抗體的來源或其制備方式(例如，通過雜交瘤、噬菌體選擇、重組表達、轉基因動物)。所述術語包含完整的免疫球蛋白以及上文在“抗體”定義下描述的片段等。
[0260]
蛋白水解酶木瓜蛋白酶優先切割igg分子以產生幾個片段，所述片段中的兩個(f(ab)片段)各自包括包含完整抗原結合位點的共價異二聚體。胃蛋白酶能夠切割igg分子以提供幾個片段，包括包含兩個抗原結合位點的f(ab')2片段。根據某些實施方案的供使用的fv片段可以通過igm的優先蛋白水解切割來產生，并且在極少情況下可以通過igg或iga免疫球蛋白分子的優先蛋白水解切割來產生。然而，更常見的是，使用本領域中已知的重組技術來得到fv片段。fv片段包括非共價的vh::vl異二聚體，其包含保留天然抗體分子的許多抗原識別和結合能力的抗原結合位點。參見inbar等人,pnas usa.69:2659-2662,1972；hochman等人,biochem.15:2706-2710,1976；以及ehrlich等人,biochem.19:4091-4096,1980。
[0261]
在某些實施方案中，設想了單鏈fv(scfv)抗體。例如，可以使用標準分子生物學技術根據本技術中關于選擇具有期望特異性的抗體的教導來制備κ體(ill等人,prot.eng.10:949-57,1997)；微型抗體(martin等人,embo j 13:5305-9,1994)；雙鏈抗體(holliger等人,pnas 90:6444-8,1993)；或janusins(traunecker等人,embo j 10:3655-59,1991；以及traunecker等人,int.j.cancer suppl.7:51-52,1992)。
[0262]
單鏈fv(scfv)多肽是共價連接的vh::vl異二聚體，其由包含通過肽編碼性接頭連接的vh和vl編碼基因在內的基因融合物表達。huston等人(pnas usa.85(16):5879-5883,1988)。已經描述了許多方法來辨別用于將來自抗體v區的天然聚集的但是化學分離的輕和重多肽鏈轉換成scfv分子的化學結構，所述scfv分子將折疊成與抗原結合位點的結構基本上類似的三維結構。參見例如huston等人的美國專利第5,091,513號和第5,132,405號；以及ladner等人的美國專利第4,946,778號。
[0263]
在某些實施方案中，本文所述的抗體或抗原結合片段呈“雙鏈抗體”的形式。雙鏈抗體是多肽的多聚體，每個多肽包含第一結構域和第二結構域，所述第一結構域包含免疫球蛋白輕鏈的結合區，所述第二結構域包含免疫球蛋白重鏈的結合區，所述兩個結構域(例如，通過肽接頭)連接但不能彼此締合以形成抗原結合位點：抗原結合位點是通過多聚體內的一個多肽的第一結構域與多聚體內的另一個多肽的第二結構域締合形成的(wo94/13804)?？贵w的dab片段由vh結構域組成(ward等人,nature 341:544-546,1989)。雙鏈抗體和其它多價或多特異性片段可以例如通過基因融合來構建(參見wo94/13804；以及holliger等人,pnas usa.90:6444-6448,1993))。
[0264]
還包括包含與ch3結構域連接的scfv的微型抗體(參見hu等人,cancer res.56:3055-3061,1996)。還參見ward等人,nature.341:544-546,1989；bird等人,science.242:423-426,1988；huston等人,pnas usa.85:5879-5883,1988)；pct/us92/09965；wo94/13804；以及reiter等人,nature biotech.14:1239-1245,1996。
[0265]
在要使用雙特異性抗體的情況下，所述抗體可以是可以以各種方式(holliger和winter,current opinion biotechnol.4:446-449,1993)制造，例如以化學方法制備或由雜種的雜交瘤制備的常規雙特異性抗體，或者可以是上文提及的雙特異性抗體片段中的任一種?？梢詢H使用可變結構域來構建沒有fc區的雙鏈抗體和scfv，從而潛在地減少抗獨特
型反應的影響。
[0266]
與雙特異性完整抗體相反，雙特異性雙鏈抗體也可能特別有用，因為其可以容易地在大腸桿菌中構建并且表達?？梢允褂檬删w展示(wo94/13804)從文庫中容易地選擇具有合適結合特異性的雙鏈抗體(和許多其它多肽，如抗體片段)。如果雙鏈抗體的一個臂保持恒定，例如，對抗原x具有特異性，則可以制備文庫，其中另一個臂是多變的并且選擇具有合適特異性的抗體?？梢酝ㄟ^杵臼結構(knobs-into-holes)工程來制備雙特異性完整抗體(ridgeway等人,protein eng.,9:616-621,1996)。
[0267]
在某些實施方案中，本文所述的抗體或抗原結合片段呈的形式。是去除了鉸鏈區的igg4抗體(參見ge nmab utrecht,the netherlands；還參見例如us20090226421)。這種抗體技術產生比當前的小抗體形式具有預期較長治療窗的穩定的較小抗體形式。igg4抗體被認為是惰性的，因此不與免疫系統相互作用。完全人igg4抗體可以通過消除抗體的鉸鏈區進行修飾以獲得相對于相應的完整igg4具有不同穩定性特性的半分子片段(ge nmab,utrecht)。將igg4分子二等分僅在上留下能夠結合同源抗原(例如，疾病靶標)的區域，并且因此，僅單價結合靶細胞上的一個位點。對于某些癌細胞表面抗原，這種單價結合可能不會刺激癌細胞像使用具有相同抗原特異性的二價抗體可以看到的那樣生長，因此，技術可以向對使用常規抗體可能難以治療的一些類型的癌癥提供治療選項。當治療一些形式的癌癥時，的小尺寸可以帶來很大的益處，允許分子在較大實體瘤上更好地分布并且潛在地提高功效。
[0268]
在某些實施方案中，本文所述的抗體和抗原結合片段呈納米抗體的形式。微型抗體由單一基因編碼并且在幾乎所有原核和真核宿主中高效地產生，所述宿主例如大腸桿菌(參見美國專利第6,765,087號)、霉菌(例如曲霉屬(aspergillus)或木霉屬(trichoderma))和酵母(例如酵母屬(saccharomyces)、克魯維酵母屬(kluyvermyces)、漢遜酵母屬(hansenula)或畢赤酵母屬(pichia)(參見美國專利第6,838,254號)。生產過程是可擴展的，并且已經產生了數千克納米抗體?？梢詫⒓{米抗體配制為具有長保質期的即用型溶液。納米克隆方法(參見wo06/079372)是一種基于b細胞的自動化高通量選擇來產生針對期望靶標的納米抗體的專有方法。
[0269]
在一些實施方案中，本文所述的抗體或抗原結合片段呈適配體的形式(參見例如ellington等人,nature.346,818-22,1990；以及tuerk等人,science.249,505-10,1990，通過引用并入)。適配體的實例包含核酸適配體(例如，dna適配體、rna適配體)和肽適配體。核酸適配體通常是指已經通過重復輪次的體外選擇或等效方法(如selex(指數富集配體的系統進化))工程化以結合諸如小分子、蛋白質、核酸，甚至細胞、組織和有機體的各種分子靶標的核酸物質。參見例如美國專利第6,376,190號和第6,387,620號，將所述美國專利通過引用并入。
[0270]
肽適配體通常包含在兩端與蛋白質支架連接的可變肽環，所述蛋白質支架是通常將肽適配體的結合親和力增加到與抗體的結合親和力相當的水平(例如，在納摩爾范圍內)的雙重結構約束。在某些實施方案中，可變環長度可以由約10-20個氨基酸(包含其間的所有整數)構成，并且支架可以包含具有良好溶解性和相容性的任何蛋白質。某些示例性實施方案將細菌蛋白硫氧還蛋白-a用作支架蛋白，可變環插入在還原活性位點內(野生型蛋白
中的-cys-gly-pro-cys-環)，其中兩個半胱氨酸側鏈能夠形成二硫橋。例如在美國申請第2003/0108532號中描述了用于鑒定肽適配體的方法，所述美國申請通過引用并入?？梢允褂帽绢I域中已知的不同系統(包含酵母雙雜交系統)來進行肽適配體選擇。
[0271]
在一些實施方案中，本文所述的抗體或抗原結合片段呈高親和性多聚體(avimer)的形式。高親和性多聚體是指使用體外外顯子改組和噬菌體展示進行工程化的多聚體結合蛋白或肽。多個結合結構域連接，導致與單一表位免疫球蛋白結構域相比更大的親和力和特異性。參見例如silverman等人,nature biotechnology.23:1556-1561,2005；美國專利第7,166,697號；以及美國申請第2004/0175756號、第2005/0048512號、第2005/0053973號、第2005/0089932號和第2005/0221384號，將以上通過引用并入。
[0272]
在一些實施方案中，本文所述的抗體或抗原結合片段呈adnectin的形式。adnectin是指一類源自人纖連蛋白的靶向生物制劑，所述人纖連蛋白是一種與其它蛋白質天然結合的豐富的細胞外蛋白。參見例如美國申請第2007/0082365號；第2008/0139791號和第2008/0220049號，所述美國申請通過引用并入。adnectin通常由天然纖連蛋白骨架以及人纖連蛋白的特定部分的多個靶向結構域組成?？梢詫邢蚪Y構域工程化以使adnectin能夠特異性識別nrp2多肽或其表位。
[0273]
在一些實施方案中，本文所述的抗體或抗原結合片段呈anticalin的形式。anticalin是指一類抗體模擬物，所述抗體模擬物通常由人脂質運載蛋白合成，所述人脂質運載蛋是具有由結構剛性框架支撐的高變環區的結合蛋白家族。參見例如美國申請第2006/0058510號。anticalin的尺寸通常為約20kda。anticalin的特征在于由八個反平行的β鏈(穩定的β桶支架)形成的桶結構，所述八個反平行的β鏈由四個肽環和一個連接α螺旋成對連接。在某些方面，在高變環區中產生實現特異性結合的構象偏差。參見例如skerra,febs j.275:2677-83,2008，將其通過引用并入。
[0274]
在一些實施方案中，本文所述的抗體或抗原結合片段呈設計的錨蛋白重復蛋白(darpin)的形式。darpin包含一類非免疫球蛋白，其可以在藥物發現和藥物開發中提供優于用于靶標結合的抗體的優勢。在其它用途中，darpin非常適于毒素或其它治療有效載荷的體內成像或遞送，因為其具有良好的分子特性，包含小尺寸和高穩定性。低成本的細菌產生和許多靶標特異性darpin的快速生成使得darpin方法可用于藥物發現。另外，darpin可以容易地以多特異性形式產生，提供了將效應子darpin靶向特定器官，或者用由幾個darpin構成的一個分子靶向多個受體的潛力。參見例如stumpp等人,curr opin drug discov devel.10:153-159,2007；美國申請第2009/0082274號；和pct/ep2001/10454，將以上通過引用并入。
[0275]
還包括重鏈二聚體，如來自駱駝科動物和鯊魚的抗體。駱駝科動物和鯊魚抗體包含v樣和c樣結構域的兩條鏈的同源二聚體對(兩者都沒有輕鏈)。由于駱駝科動物中的重鏈二聚體igg的vh區不必與輕鏈進行疏水相互作用，因此在駱駝科動物中，重鏈中通常與輕鏈接觸的區變成親水性氨基酸殘基。重鏈二聚體igg的vh結構域被稱為vhh結構域。鯊魚ig-nar包含一個可變結構域(被稱為v-nar結構域)和五個c樣恒定結構域(c-nar結構域)的同源二聚體。
[0276]
在駱駝科動物中，抗體庫的多樣性由vh或vhh區中的互補決定區(cdr)1、2和3決定。駱駝vhh區中的cdr3的特征在于其相對長平均為16個氨基酸的長度(muyldermans等人,
1994,protein engineering 7(9):1129)。這與許多其它物種的抗體的cdr3區形成對比。例如，小鼠vh的cdr3具有平均9個氨基酸?？梢酝ㄟ^例如在2005年2月17日公布的美國專利申請序列號20050037421中公開的方法來產生維持駱駝科動物的可變區的體內多樣性的駱駝科動物來源的抗體可變區的文庫。
[0277]
在某些實施方案中，抗體或其抗原結合片段是人源化的。這些實施方案是指通常使用重組技術制備的嵌合分子，所述嵌合分子具有來源于來自非人物種的免疫球蛋白的抗原結合位點以及基于人免疫球蛋白的結構和/或序列的分子的剩余的免疫球蛋白結構?？乖Y合位點可以包含融合到恒定結構域的完整可變結構域或者僅移植到可變結構域中的合適框架區的cdr。表位結合位點可以是野生型的或者可以由一個或多個氨基酸取代修飾。這消除了在人類個體中作為免疫原的恒定區，但仍保持對外源可變區的免疫應答的可能性(lobuglio等人,pnas usa 86:4220-4224,1989；queen等人,pnas usa.86:10029-10033,1988；riechmann等人,nature.332:323-327,1988)。用于抗體人源化的說明性方法包括美國專利第7,462,697號中所述的方法。
[0278]
另一種方法不僅集中于提供人來源的恒定區，還著重于修飾可變區，以便盡可能地將其重塑為人形式。已知重鏈和輕鏈兩者的可變區均含有側翼是四個框架區(fr)的三個互補決定區(cdr)，所述三個互補決定區響應于所討論的表位而變化并且決定結合能力，所述四個框架區在給定物種中相對保守并且推定為cdr提供支架。當關于特定表位制備非人抗體時，可以通過將來源于非人抗體的cdr移植到要修飾的人抗體中存在的fr上來對可變區進行“重塑”或“人源化”。sato等人,cancer res.53:851-856,1993；riechmann等人,nature 332:323-327,1988；verhoeyen等人,science 239:1534-1536,1988；kettleborough等人,protein engineering.4:773-3783,1991；maeda等人,human antibodies hybridoma 2:124-134,1991；gorman等人,pnas usa.88:4181-4185,1991；tempest等人,bio/technology 9:266-271,1991；co等人,pnas usa.88:2869-2873,1991；carter等人,pnas usa.89:4285-4289,1992；以及co等人,j immunol.148:1149-1154,1992已經報道了這種方法至各種抗體中的應用。在一些實施方案中，人源化抗體保留所有cdr序列(例如，含有來自小鼠抗體的所有六個cdr的人源化小鼠抗體)。在其它實施方案中，人源化抗體具有相對于原始抗體改變的一個或多個cdr(一個、兩個、三個、四個、五個、六個)，其也被稱為“來源于”來自原始抗體的一個或多個cdr的一個或多個cdr。
[0279]
在某些實施方案中，抗體是“嵌合”抗體。在這方面，嵌合抗體包含抗體的與不同抗體的異源fc部分可操作連接的或以其它方式融合的抗原結合片段。在某些實施方案中，fc結構域或異源fc結構域是人起源的。在某些實施方案中，fc結構域或異源fc結構域是小鼠起源的。在其它實施方案中，異源fc結構域可以來自與親本抗體不同的ig類，包括iga(包括亞類iga1和iga2)、igd、ige、igg(包括亞類igg1、igg2、igg3和igg4)以及igm。在另外的實施方案中，異源fc結構域可以包含來自不同ig類中的一種或多種的ch2和ch3結構域。如上文關于人源化抗體所述，嵌合抗體的抗原結合片段可以僅包含本文所述的抗體的一個或多個cdr(例如，本文所述的抗體的1個、2個、3個、4個、5個或6個cdr)，或者可以包含整個可變結構域(vl、vh或兩者)。
[0280]
如本文所用，“處于”發生疾病或不良反應風險的對象可能患有或可能不患有可檢測的疾病或疾病癥狀，并且在本文所述的治療方法之前可能展現出或可能未展現出可檢測
的疾病或疾病癥狀?！疤幱?br/>……
的風險”表示對象具有一個或多個風險因素，所述風險因素是如本文所述的和本領域已知的與疾病的發展相關的可測量參數。具有這些風險因素中的一個或多個的對象比沒有這些風險因素中的一個或多個的對象具有更高的發生疾病或不良反應的可能性。
[0281]“生物相容的”是指通常不會對細胞或對象的生物功能造成損害并且不會導致任何程度的不可接受的毒性(包括過敏和疾病狀態)的材料或化合物。
[0282]
術語“結合”是指由于例如共價、靜電、疏水和離子和/或氫鍵相互作用(包括諸如鹽橋和水橋的相互作用)而產生的兩個分子之間的直接締合。
[0283]
術語“化學抗性”是指在暴露于化療后癌細胞群的治療敏感性隨時間的變化，包括對癌癥免疫治療劑、化療劑、激素治療劑和/或激酶抑制劑中的至少一種的抗性。最終，化學抗性導致癌癥的復發和/或轉移，并挑戰對癌癥患者的臨床結果的改善。它仍然是長期成功癌癥治療的主要障礙。例如，大約30％的診斷患有早期乳腺癌的女性最終發展出抗性并最終發展成轉移性乳腺癌?；瘜W抗性的分子機制包括轉運泵、癌基因、腫瘤抑制基因、線粒體改變、dna修復、自噬、上皮-間充質轉化(emt)、癌癥干性和外來體產生的誘導。這些過程可以經由不同的機制單獨或彼此組合進行操作，但最終協調以防止響應于特定靶向化療劑的細胞死亡。例如，此類方法提供替代的促生長信號和/或消除或以其他方式減少凋亡途徑。因此，降低化學抗性的藥劑可用于治療或減少化學抗性癌癥。
[0284]“編碼序列”意指有助于基因的多肽產物的編碼的任何核酸序列。相比之下，術語“非編碼序列”是指不直接有助于基因的多肽產物的編碼的任何核酸序列。
[0285]
在整個本公開內容中，除非上下文另有要求，否則詞語“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”將被理解為暗示包含所陳述的步驟或元件或者步驟或元件的組，但不排除任何其它步驟或元件或者步驟或元件的組。
[0286]“由...組成”意指包括并限于短語“由...組成”之后的任何內容。因此，短語“由...組成”指示所列元素是必需的或強制性的，并且可以不存在其它元素?！盎旧嫌?..組成”意指包括在所述短語之后列出的任何元素，并且限于不干擾或有助于本公開內容中對所列元素指定的活性或作用的其它元素。因此，短語“基本上由...組成”指示所列元素是必需的或強制性的，但其它元素是任選的并且可以存在或不存在，這取決于其是否實質上影響所列元素的活性或作用。
[0287]
在抗體的語境中，術語“效應子功能”或“adcc效應子功能”是指所述抗體與免疫系統的其它分支結合的能力，包括例如經典補體途徑的活化，或通過fc受體的結合。補體依賴性途徑主要由c1q與具有聚集的抗體fc結構域的c1復合物的相互作用驅動?？贵w依賴性細胞毒性(adcc)主要由效應細胞(自然殺傷細胞、巨噬細胞、單核細胞和嗜酸性粒細胞)表面上的fc受體(fcr)的相互作用驅動，所述fc受體與自身與靶細胞結合的igg的fc區結合。fc受體(fcr)是將抗體介導的(體液)免疫應答與細胞效應子功能關聯的關鍵免疫調節受體。已經鑒定了所有類別的免疫球蛋白的受體，包括fcγr(igg)、fcεri(ige)、fcαri(iga)、fcμr(igm)和fcδr(igd)。在白細胞上發現了存在至少三類人igg的受體：cd64(fcγri)、cd32(fcγriia、fcγriib和fcγriic)和cd16(fcγriiia和fcγriiib)。fcγri被歸類為高親和力受體(納摩爾范圍kd)，而fcγrii和fcγriii具有低至中等的親和力(微摩爾范圍kd)。在fc結合時，觸發信號傳導途徑，這導致介導靶細胞破壞的各種物質如裂解酶、穿孔素、顆
粒酶和腫瘤壞死因子的分泌。adcc效應子功能的水平因人igg亞型而異。雖然這取決于同種異型和特異性fcvr，但簡單地說，adcc效應子功能對于人igg1和igg3而言是“高的”，并且對于igg2和igg4而言是“低的”。
[0288]
術語“不含內毒素”或“基本上不含內毒素”通常是指至多含有痕量(例如，對對象沒有臨床上不利的生理作用的量)的內毒素，并且優選地含有不可檢測的量的內毒素的組合物、溶劑和/或容器。內毒素是與某些微生物，如細菌(通常為革蘭氏陰性細菌)相關的毒素，盡管可以在諸如單核細胞增生李斯特氏菌(listeria monocytogenes)的革蘭氏陽性細菌中發現內毒素。最普遍的內毒素是在各種革蘭氏陰性細菌的外膜中發現的脂多糖(lps)或脂寡糖(los)，其代表這些細菌引起疾病的能力中的中心致病特征。人體中的少量內毒素可能引起發熱、血壓降低以及炎癥和凝固的活化等不良生理作用。
[0289]
因此，在藥物生產中，通?？扇〉氖菑乃幤泛?或藥物容器中去除大部分或所有痕量的內毒素，因為即使少量也可能對人產生不良作用。為此目的可以使用去熱原烘箱，因為分解大多數內毒素通常需要超過300℃的溫度。例如，基于諸如注射器或小瓶的初級包裝材料，250℃的玻璃溫度和30分鐘的保持時間的組合通常足以實現內毒素水平的3log減少。設想了去除內毒素的其它方法，包括例如如本文所述的和本領域中已知的色譜法和過濾方法。
[0290]
可以使用本領域中已知的常規技術來檢測內毒素。例如，利用來自鱟的血液的鱟變形細胞裂解物(limulus amoebocyte lysate)測定是用于檢測內毒素存在的非常靈敏的測定。在該測試中，由于放大該反應的強大的酶促級聯，非常低水平的lps就可引起鱟裂解物的可檢測凝固。還可以通過酶聯免疫吸附測定(elisa)定量內毒素。為了基本上不含內毒素，內毒素水平可以小于約0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.08、0.09、0.1、0.5、1.0、1.5、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9或10eu/mg的活性化合物。通常，1ng脂多糖(lps)對應于約1-10eu。
[0291]
術語“表位”包括能夠特異性結合免疫球蛋白或t細胞受體的任何決定簇，優選多肽決定簇。表位包括由抗體結合的抗原的區域。在某些實施方案中，表位決定簇包括分子的化學活性表面基團，如氨基酸、糖側鏈、磷?；蚧酋；?，并且在某些實施方案中可以具有特定的三維結構特點和/或特定的電荷特點。關于抗原(例如，nrp2多肽)的一級結構，表位可以是連續的或非連續的。在特定的實施方案中，表位包含本文所述的參考序列(參見例如表n1)或靶分子的約、至少約或不超過約3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個或20個連續氨基酸(即線性表位)或非連續氨基酸(即構象表位)、由其組成或基本上由其組成。
[0292]“表位”包括能夠形成與結合蛋白的可變區結合口袋相互作用的結合相互作用的抗原或其它大分子的部分。這種結合相互作用可以表現為與cdr的一個或多個氨基酸殘基的分子間接觸?？乖Y合可以涉及cdr3或cdr3對。表位可以是線性肽序列(即，“連續的”)，或者可以由不連續的氨基酸序列構成(即，“構象的”或“不連續的”)。結合蛋白可以識別一個或多個氨基酸序列；因此，表位可以限定多于一個不同的氨基酸序列。結合蛋白識別的表位可以通過本領域技術人員眾所周知的肽圖和序列分析技術來測定?！半[蔽表位”或“隱蔽結合位點”是蛋白質序列的表位或結合位點，其在未修飾的多肽內未暴露或在未修飾的多肽內基本上受到保護而不會被識別，但能夠被變性的或蛋白水解的多肽的結合蛋白識別。
在未修飾的多肽結構中未暴露或僅部分暴露的氨基酸序列是潛在的隱蔽表位。如果表位未暴露或者僅部分暴露，則其很可能埋在多肽的內部?？梢岳缤ㄟ^檢查未修飾的多肽的三維結構來鑒定候選隱蔽表位。
[0293]
術語“半數最大有效濃度”或“ec
50”是指如本文所述的藥劑(例如，抗體)的以下濃度，在該濃度下，所述藥劑在一些特定的暴露時間后誘導基線與最大值之間的半數反應；因此，分級劑量-反應曲線(graded dose response curve)的ec
50
代表化合物的以下濃度，在該濃度下，觀察到所述化合物最大效應的50％。ec50也代表在體內獲得最大效應的50％所需的血漿濃度。類似地，“ec
90”是指藥劑或組合物的以下濃度，在該濃度下，觀察到所述藥劑或組合物的最大效應的90％?！癳c
90”可以根據“ec50”和希爾斜率(hill slope)計算，或者可以使用本領域的常規知識直接根據數據測定。在一些實施方案中，藥劑(例如，抗體)的ec50小于約0.01nm、0.05nm、0.1nm、0.2nm、0.3nm、0.4nm、0.5nm、0.6nm、0.7nm、0.8nm、0.9nm、1nm、2nm、3nm、4nm、5nm、6nm、7nm、8nm、9nm、10nm、11nm、12nm、13nm、14nm、15nm、16nm、17nm、18nm、19nm、20nm、25nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、200nm或500nm。在一些實施方案中，藥劑的ec
50
值為約1nm或更小。
[0294]“免疫應答”意指源于免疫系統的任何免疫學應答，包括來自細胞和肱骨、先天和適應性免疫系統的應答。示例性細胞免疫細胞包括例如淋巴細胞、巨噬細胞、t細胞、b細胞、nk細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、樹突狀細胞、肥大細胞、單核細胞及其所有亞群。細胞應答包括例如效應子功能、細胞因子釋放、吞噬作用、胞葬作用、易位、運輸、增殖、分化、活化、抑制、細胞間相互作用、凋亡等。肱骨應答包括例如igg、igm、iga、ige應答及其相應的效應子功能。
[0295]
諸如抗體的藥劑的“半衰期”可以指相對于在施用到有機體的血清或組織中時的藥理學、生理學或其它活性或者相對于任何其它限定的時間點，藥劑喪失此類活性的一半所耗費的時間?！鞍胨テ凇边€可以指藥劑的量或濃度相對于施用到有機體的血清或組織中時的此類量或濃度或相對于任何其它限定的時間點減少施用到有機體的血清或組織中的起始量的一半所耗費的時間?？梢栽谘搴?或任何一種或多種選定組織中測量半衰期。
[0296]
術語“調節”和“改變”包括相對于對照通常以統計上顯著的或生理學上顯著的量或程度“增加”、“增強”或“刺激”以及“降低”或“減少”?！霸黾拥摹?、“刺激的”或“增強的”量通常是“統計上顯著的”量，并且可以包括相對于在無組合物(例如，不存在藥劑)的情況下或在對照組合物的情況下產生的量增加1.1倍、1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍或更多倍(例如，500倍、1000倍)(包含其間的所有整數和范圍，例如，1.5、1.6、1.7、1.8等)?！敖档偷摹被颉皽p少的”量通常是“統計上顯著的”量，并且可以包括相對于在無組合物(例如，不存在藥劑)的情況下或在對照組合物的情況下產生的量減少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％(包含其間的所有整數和范圍)。本文描述了比較和“統計上顯著的”量的實例。
[0297]
術語“游走細胞”是指能夠響應于刺激而從一個地方移動到另一個地方的細胞。示例性游走細胞包括免疫細胞，如單核細胞；自然殺傷(nk)細胞；樹突狀細胞(未成熟的或成熟的)；樹突狀細胞的亞群，包括髓樣細胞、漿細胞樣細胞(也稱為淋巴樣細胞)和朗格漢斯
細胞(langerhans cell)；巨噬細胞，如組織細胞，組織駐留巨噬細胞，如庫普弗細胞(kupffer's cell)、cns中的小膠質細胞、肺泡巨噬細胞和腹膜巨噬細胞；巨噬細胞亞型，如m0、m1、mox、m2a、m2b和m2c巨噬細胞；嗜中性粒細胞；嗜酸性粒細胞；肥大細胞；嗜堿性粒細胞；b細胞，包括血漿b細胞、記憶b細胞、b-1細胞和b-2細胞；cd45ro(自然t)細胞；cd45ra(記憶t)細胞；cd4輔助性t細胞，包括th1、th2和tr1/th3細胞；cd8細胞毒性t細胞；調節性t細胞；γδt細胞；以及胸腺細胞。游走細胞的另外實例包括成纖維細胞、纖維細胞、腫瘤細胞和干細胞。術語“細胞遷移”是指游走細胞的移動，并且術語“細胞遷移的調節”是指對任何此類游走細胞的移動的調節。
[0298]
術語“多肽”、“蛋白質”和“肽”可互換使用，并且意指不限于任何特定長度的氨基酸聚合物。術語“酶”包括多肽或蛋白質催化劑。所述術語包括諸如豆蔻?；?、硫酸化、糖基化、磷酸化以及信號序列的添加或缺失的修飾。術語“多肽”或“蛋白質”意指一條或多條氨基酸鏈，其中每條鏈包含通過肽鍵共價連接的氨基酸，并且其中所述多肽或蛋白質可以包含通過肽鍵非共價和/或共價連接在一起的多條鏈，具有天然蛋白質(即，通過天然存在的，特別是非重組細胞、或基因工程化的或重組細胞產生的蛋白質)的序列，并且包含具有天然蛋白質的氨基酸序列的分子或者具有天然序列的一個或多個氨基酸的缺失、添加和/或取代的分子。在某些實施方案中，多肽是由重組細胞產生的“重組”多肽，所述重組細胞包含一個或多個重組dna分子，其通常由在細胞中無法另外找到的異源多核苷酸序列或多核苷酸序列的組合制成。
[0299]
術語“多核苷酸”和“核酸”包括mrna、rna、crna、cdna和dna。所述術語通常是指核糖核苷酸或者脫氧核苷酸或者任一種類型的核苷酸的修飾形式的長度為至少10個堿基的核苷酸的聚合形式。所述術語包括單鏈和雙鏈形式的dna。術語“分離的dna”和“分離的多核苷酸”及“分離的核酸”是指已經被分離成不含特定物種的總基因組dna的分子。因此，編碼多肽的分離的dna區段是指以下dna區段，其含有一個或多個編碼序列，但基本上從獲得所述dna區段的物種的總基因組dna分離出去或被純化成不含所述總基因組dna。還包括不編碼多肽的非編碼多核苷酸(例如，引物、探針、寡核苷酸)。還包括重組載體，包括例如表達載體、病毒載體、質粒、粘粒、噬菌粒、噬菌體、病毒等。
[0300]
在本文所述的多核苷酸內可以但不必存在另外的編碼或非編碼序列，并且多核苷酸可以但不必與其它分子和/或支撐材料連接。因此，多核苷酸或可表達的多核苷酸(無論編碼序列本身的長度如何)都可以與其它序列，例如表達控制序列組合。
[0301]“表達控制序列”包括核酸或相應氨基酸的調控序列，如啟動子、前導子、增強子、內含子、rna或dna結合蛋白的識別基序、聚腺苷酸化信號、終止子、內部核糖體進入位點(ires)、分泌信號、亞細胞定位信號等，其具有影響宿主細胞中的編碼序列的轉錄或翻譯或者亞細胞或細胞定位的能力。goeddel；gene expression technology:methods in enzymology 185,academic press,san diego,calif.(1990)中描述了示例性表達控制序列。
[0302]“啟動子”是能夠與細胞中的rna聚合酶結合并啟動下游(3’方向)編碼序列的轉錄的dna調控區。如本文所用，啟動子序列在其3’端處由轉錄起始位點為界并且向上游(5’方向)延伸以包括在高于背景時可檢測的水平下啟動轉錄所必需的最小數量的堿基或元件?？梢栽趩幼有蛄幸约柏撠焤na聚合酶結合的蛋白質結合結構域(共有序列)內找到轉錄起
始位點(通過用核酸酶s1作圖方便地限定)。真核啟動子通?？梢缘豢偸呛小皌ata”盒和“cat”盒。除了-10和-35共有序列外，原核啟動子還含有夏因-達爾加諾序列(shine-dalgarno sequence)。
[0303]
來自多種不同來源的大量啟動子(包括組成型、誘導型和阻遏型啟動子)在本領域中是眾所周知的。代表性來源包括例如病毒、哺乳動物、昆蟲、植物、酵母和細菌細胞類型，并且來自這些來源的合適的啟動子是容易獲得的，或者可以基于在線公開獲得的或例如來自諸如atcc的保藏機構以及其它商業或個人來源的序列以合成方式制備。啟動子可以是單向的(即，在一個方向上啟動轉錄)或雙向的(即，啟動3’或5’方向上的轉錄)。啟動子的非限制性實例包括例如t7細菌表達系統、pbad(araa)細菌表達系統、巨細胞病毒(cmv)啟動子、sv40啟動子、rsv啟動子。誘導型啟動子包括tet系統(美國專利5,464,758和5,814,618)、蛻皮激素誘導型系統(no等人,proc.natl.acad.sci.(1996)93(8):3346-3351)；t-rextm系統(invitrogen carlsbad,ca)、(stratagene,(san diego,ca))和cre-ert三苯氧胺誘導型重組酶系統(indra等人,nuc.acid.res.(1999)27(22):4324-4327；nuc.acid.res.(2000)28(23):e99；美國專利第7,112,715號；以及kramer&fussenegger,methods mol.biol.(2005)308:123-144)或本領域已知的適于在期望細胞中表達的任何啟動子。
[0304]“可表達的多核苷酸”包括cdna、rna、mrna或其它多核苷酸，其包含至少一個編碼序列和任選地至少一個表達控制序列(例如，轉錄和/或翻譯調控元件)并且可以在引入到細胞(例如，對象的細胞)中時表達編碼的多肽。
[0305]
可以用于遞送可表達的多核苷酸的各種病毒載體包括腺病毒載體、皰疹病毒載體、痘苗病毒載體、腺相關病毒(aav)載體和逆轉錄病毒載體。在一些情況下，逆轉錄病毒載體是鼠或禽類逆轉錄病毒的衍生物，或者是慢病毒載體?？梢圆迦雴蝹€外源基因的逆轉錄病毒載體的實例包括但不限于：莫洛尼鼠白血病病毒(moloney murine leukemia virus，momulv)、哈維鼠肉瘤病毒(harvey murine sarcoma virus，hamusv)、鼠乳腺腫瘤病毒(mumtv)、siv、biv、hiv和勞斯肉瘤病毒(rous sarcoma virus，rsv)。許多另外的逆轉錄病毒載體可以摻入多個基因。所有這些載體都可以轉移或摻入可選擇標志物的基因，使得可以鑒定和產生轉導的細胞。通過例如將目的多肽序列連同編碼特定靶細胞上的受體的配體的另一個基因一起插入到病毒載體中，可以使載體具有靶標特異性?？梢酝ㄟ^插入例如編碼蛋白質的多核苷酸來使逆轉錄病毒載體具有靶標特異性。說明性的靶向可以通過使用抗體靶向逆轉錄病毒載體來實現。本領域技術人員將了解或者無需過度實驗就可以容易地確定可以插入到逆轉錄病毒基因組中以允許逆轉錄病毒載體的靶標特異性遞送的特定多核苷酸序列。
[0306]
在特定的實施方案中，可表達的多核苷酸是修飾的rna或修飾的mrna多核苷酸，例如，非天然存在的rna類似物。在某些實施方案中，修飾的rna或mrna多肽包含一個或多個修飾的或非天然的堿基，例如除腺嘌呤(a)、鳥嘌呤(g)、胞嘧啶(c)、胸腺嘧啶(t)和/或尿嘧啶(u)之外的核苷酸堿基。在一些實施方案中，修飾的mrna包含一個或多個修飾的或非天然的核苷酸間連鍵。例如在kormann等人,nat biotechnol.29:154-7,2011；以及美國申請第2015/0111248號；第2014/0243399號；第2014/0147454號以及第2013/0245104號(將其通過引用以其整體并入)中描述了用于遞送編碼的治療多肽的可表達的rna多核苷酸。
[0307]
本文提及的術語“分離的”多肽或蛋白質意味著主題蛋白質：(1)不含在自然界中通常發現的與其一起的至少一些其它蛋白質；(2)基本上不含來自同一來源，例如來自同一物種的其它蛋白質；(3)由來自不同物種的細胞表達；(4)已經與在自然界中與其締合的至少約50％的多核苷酸、脂質、碳水化合物或其它材料分離；(5)不與在自然界中締合“分離的蛋白質”的蛋白質部分締合(通過共價或非共價相互作用)；(6)與在自然界中不與其締合的多肽可操作地締合(通過共價或非共價相互作用)；或者(7)在自然界中不存在。此類分離的蛋白質可以由基因組dna、cdna、mrna或其它rna編碼，或者可以是合成來源的，或者它們的任何組合。在某些實施方案中，分離的蛋白質基本上不含在其天然環境中發現的會干擾其使用(治療、診斷、預防、研究或其它)的蛋白質或多肽或其它污染物。
[0308]
在某些實施方案中，可以限定組合物中的任何給定藥劑(例如，諸如抗體的多肽)的“純度”。例如，某些組合物可以包含諸如多肽藥劑的藥劑，以蛋白質計或以重量-重量計，所述藥劑的純度為至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，包括其間的所有小數和范圍，如例如但決不限于通過高效液相色譜法(hplc)所測量的，所述hplc是生物化學和分析化學中常用于分離、鑒定和定量化合物的柱色譜法的眾所周知形式。
[0309]“脂質納米顆?！被颉肮腆w脂質納米顆?！笔侵钙骄睆綖榧s10納米至約1000納米并且包含可以溶解親脂性分子的固體脂質核心基質的一種或多種球形納米顆粒。脂質核心由表面活性劑(例如，乳化劑)穩定，并且可以包括甘油三酯(例如，三硬脂酸甘油酯)、甘油二酯(例如，glycerol bahenate)、甘油單酯(例如，單硬脂酸甘油酯)、脂肪酸(例如，硬脂酸)、類固醇(例如，膽固醇)和蠟(例如，棕櫚酸鯨蠟酯)中的一種或多種，包括其組合。例如在petrilli等人,curr pharm biotechnol.15:847-55,2014；以及美國專利第6,217,912號；第6,881,421號；第7,402,573號；第7,404,969號；第7,550,441號；第7,727,969號；第8,003,621號；第8,691,750號；第8,871,509號；第9,017,726號；第9,173,853號；第9,220,779號；第9,227,917號和第9,278,130號(將其通過引用以其整體并入)中描述了脂質納米顆粒。本文所述的某些組合物是用一種或多種脂質納米顆粒配制的。
[0310]
術語“神經纖毛蛋白2相關疾病”或“nrp2相關疾病”是指以下疾病和病況，其中nrp2活性、表達和/或空間分布在該疾病或病況的病理生理學中起作用。在一些情況下，由本公開內容的抗nrp2抗體通過改變nrp2與至少一種nrp2配體的相互作用以影響nrp2活性、信號傳導、表達和/或空間分布，來調節nrp2相關疾病。示例性nrp2相關疾病和病況包括但不限于癌癥和與癌癥相關的疾病或病狀，包括癌細胞生長、癌癥起始、癌癥遷移、癌細胞粘附、侵襲、化學抗性和轉移。還包括與炎癥和自身免疫以及相關炎性疾病相關的疾病，包括與不適當的免疫細胞活化或遷移相關的疾病，如移植物抗宿主病(gvhd)。另外的實例包括與淋巴發育、淋巴管生成和淋巴損傷相關的疾病，包括水腫、淋巴水腫、繼發性淋巴水腫、不適當的脂肪吸收和沉積、過量的脂肪沉積和血管通透性。還包括與感染(包含潛伏感染)相關的疾病以及與過敏性病癥/疾病和過敏反應相關的疾病，包括慢性阻塞性肺病癥(copd)、中性粒細胞性哮喘、抗中性粒細胞胞漿抗體(anca)相關的系統性血管炎、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、炎性小體相關疾病和皮膚相關嗜中性粒細胞介導的疾病，如壞疽性膿皮病。另外的實例包括與肉芽腫性炎性疾病相關的疾病，包括結節病和肉芽腫；以及纖維化疾病，包括子宮內膜異位、纖維化、內皮向間充質轉化(emt)和傷口愈合等。還包括與不適當的
平滑肌收縮性、平滑肌補償和失調、血管平滑肌細胞遷移和/或粘附相關的疾病，以及與不適當的自噬、吞噬作用和�